Мб 8: ТИПОВАЯ МЕЖОТРАСЛЕВАЯ ФОРМА N МБ-8 / КонсультантПлюс

Размер информации в компьютере измеряется в килобайтах, мегабайтах, гигабайтах и ​​терабайтах.В этом разделе мы рассмотрим распространенные размеры, которые вы можете увидеть в реальной жизни, и научимся рассуждать о различном количестве байтов.

килобайт или

• килобайт КБ — около 1 тыс. Байт
• Как известно, 1 байт — это один типизированный символ
  — почему здесь требуется фраза «около 1 тысячи», см. Ниже
• Электронное письмо без изображений составляет около 2 КБ.
• Пятистраничная бумага может быть 100 КБ
• Текст компактный, требует меньше байтов по сравнению с изображениями, звуком или видео.
• эл.грамм. 23000 байт — это около 23 КБ

Один килобайт (КБ) — это совокупность около 1000 байт. Страница обычного латинского алфавитного текста занимает около 2 килобайт для хранения (примерно один байт на букву). Обычное короткое электронное письмо также занимает всего 1-2 килобайта. Текст — один из наиболее компактных типов данных, для хранения каждой буквы требуется около одного байта. В нелатинских алфавитах, таких как китайский, память занимает 2 или 4 байта на «букву», что все еще довольно компактно по сравнению со звуком и изображениями.

Мегабайт или

• мегабайт (МБ) — около 1 миллиона байт
• он же около 1000 КБ
• Звук в формате MP3 составляет около 1 мегабайта в минуту
• Цифровое изображение высокого качества — около 2-5 мегабайт.
• например 45400 КБ это 45,4 МБ

Один мегабайт составляет около 1 миллиона байтов (или около 1000 килобайт). Аудиофайл MP3 длительностью в несколько минут или изображение размером 10 миллионов пикселей с цифровой камеры обычно занимает несколько мегабайт. Практическое правило для аудио в формате MP3: 1 минута звука занимает около 1 мегабайта.Аудио, изображения и видео данные обычно хранятся в «сжатой» форме, например MP3. О том, как работает сжатие, поговорим позже. На компакт-диске с данными хранится около 700 МБ. Звук на компакт-диске не сжимается, поэтому он занимает гораздо больше места, чем MP3. Серия битов представлена ​​спиральной траекторией крошечных ямок в серебряном материале на диске. Представьте, что каждая лунка интерпретируется как 0, а отсутствие углубления — как 1 при считывании спиральной последовательности. Интересный факт: вся спираль на компакт-диске имеет длину более 5 км.

Математика — вы попробуете

• 2 000 000 байт — это примерно сколько МБ? Показать решение

  2000000 байт = 2 МБ

• 23000 КБ — это примерно сколько МБ? Показать решение

  23000 КБ = 23 МБ (1000 КБ = 1 МБ)

• 500 КБ — это примерно сколько МБ? Показать решение

  500 КБ = 0,5 МБ

  гигабайт или

  ГБ
  • гигабайт ГБ = около миллиарда байт
  • он же около 1000 МБ
  • ГБ — обычная единица для современного оборудования
  • эл.грамм. 4000 МБ = 4 ГБ
  • Обычный компьютер может иметь:
    -4 ГБ или RAM
    -256 ГБ постоянного хранилища
  • Объем DVD-диска 4,7 ГБ (однослойный)
  • -Цифра 2 ГБ в час видео (сильно различается)
  • Флеш-накопитель может вместить 32 ГБ
  • Жесткий диск может вмещать 750 ГБ

  Один гигабайт (ГБ) составляет около 1 миллиарда байтов или 1 тысячи мегабайт. На компьютере может быть 4 ГБ ОЗУ. Карта флэш-памяти, используемая в фотоаппарате, может хранить 16 ГБ.DVD-фильм занимает примерно 4-8 ГБ.

  • Математика — вы попробуете
  • Сколько ГБ в 4 000 000 000 байт? Показать решение

    4 миллиарда байт = 4 ГБ

  • Допустим, у вас много изображений JPEG размером 5 МБ. Сколько уместится на флешке на 16 Гб? Показать решение

    (конвертировать все в МБ)
    16 ГБ — 16000 МБ
    16 000/5 = 3 200

    ТБ или

    ТБ

    Один терабайт (ТБ) составляет около 1000 гигабайт или примерно 1 триллион байтов. Сегодня вы можете купить жесткие диски на 4 ТБ, поэтому мы начинаем время, когда этот термин вошел в обиход.Гигабайт тоже был экзотическим термином, пока закон Мура не сделал его общепринятым.

    Гигагерц — скорость, а не байты

    Один гигагерц — это 1 миллиард циклов в секунду (мегагерц — миллион циклов в секунду). Гигагерц — это мера скорости, очень грубо говоря, скорость, с которой центральный процессор может выполнять свою простейшую операцию в секунду. Гигагерцы не могут точно сказать вам, как быстро процессор выполняет работу, но это примерно коррелирует. Процессоры с более высокой частотой гигагерца также обычно дороже в производстве, и они потребляют больше энергии (и, как следствие, выделяют больше тепла) — проблема для установки быстрых процессоров в небольшие устройства, такие как телефоны.Компания ARM известна тем, что производит очень производительные чипы с минимальным потреблением энергии и тепла. Почти все сотовые телефоны в настоящее время используют процессоры ARM.

    Проблемы со словами в килобайтах / мегабайтах / гигабайтах

    Вам должно быть комфортно выполнять простую арифметику для определения размеров МБ / ГБ, точно так же, как вы должны уметь выполнять базовые вычисления с секундами, милями, килограммами и т. Д.

    Базовый план: перед добавлением мер X и Y преобразуйте их в одни и те же единицы.

    Проблемы со словами	Решение
    У Алисы 600 МБ данных.У Боба 2000 МБ данных. Уместится ли все это на флешке Алисы на 4 ГБ?	счет Да, подходит: 600 МБ + 2000 МБ — 2600 МБ. 2600 МБ — это 2,6 ГБ, поэтому он без проблем уместится на диске 4 ГБ. Точно так же можно сказать, что на диске 4 ГБ есть место для 4000 МБ.
    У Алисы 100 маленьких изображений, каждое из которых имеет размер 500 КБ. Сколько места они занимают в МБ?	счет 100 раз 500 КБ — это 50000 КБ, то есть 50 МБ.
    Ваша группа по охоте за привидениями записывает звук в классной комнате в Стэнфорде в течение 20 часов в виде аудиофайлов в формате MP3.Примерно сколько данных будет выражено в ГБ?	счет Звук в формате MP3 занимает около 1 МБ в минуту. 20 часов, 60 минут / час, 20 * 60 дает 1200 минут. Это примерно 1200 МБ, то есть 1,2 ГБ.

    Альтернативная терминология: Kibibyte Mebibyte Gibibyte Tebibyte

    В компьютере удобно организовывать вещи в группы со степенью 2. Например, 2 ¹⁰ равно 1024, и поэтому программа может сгруппировать 1024 элемента вместе, как своего рода «круглое» количество элементов внутри компьютера.Вышеупомянутый термин «килобайт» относится к этой группе размером 1024 объекта. Однако люди также группируют вещи по тысячам — 1 тысяча или 1 миллион предметов.

    Есть такая проблема со словом «мегабайт»: означает ли оно 1024 * 1024 байта, т.е. 2 ²⁰ , что составляет 1 048 576, или означает ровно 1 миллион, 1000 * 1000. Разница всего 5%, но маркетологи, как правило, предпочитают интерпретацию 1 миллиона, поскольку это заставляет их жесткие диски и т.д. Кроме того, разница становится все больше и больше для размеров гигабайта и терабайта.В попытке исправить это были введены термины «кибибайт», «мебибайт», «гибибайт», «тебибайт», чтобы конкретно обозначать единицы на основе 1024 (см. Статью в Википедии о кибибайтах). Похоже, что до сих пор эти термины не очень сильно прижились. По крайней мере, помните, что такие термины, как «мегабайт», имеют небольшое пространство для маневра между значениями от 1024 до 1000. Мы никогда не будем ставить оценку за это отличие. «Около миллиона» будет нашей достаточно близкой интерпретацией «мегабайта».

% PDF-1.4 % 1 0 объект > эндобдж 8 0 объект > эндобдж 2 0 obj > эндобдж 3 0 obj > эндобдж 4 0 obj > транслировать 2020-04-14T16: 21: 48 + 02: 002020-04-14T16: 21: 48 + 02: 002020-04-14T16: 21: 48 + 02: 00Adobe InDesign 15.0 (Macintosh) uuid: c8b01613-c4cf-c143- 9594-8def00097c2axmp.did: 5820f0ea-7102-441c-8045-d21f4e116a87xmp.id: 0c6ccf59-cdb2-45eb-aace-5a5241427052proof: pdf

uc S1 $ pAMRU է NͷIm / j = C / ~ L39 ߷} y}}] ;; ǵ # ko r ޤ lsJ | ح Q_6:> uP_vax Գ ZO \ 6GT ݮ xm ~ wQ7’mL-ArSw; Oiԗ; B [^ Lf83 1k $; 72Gsni;% 1 / mVǷ # R9n = 1 ‘Ž \ e + tt (KN: a? | O9N? L6S -> J # wjF_ ֆ K5ʆyx օ Uh

Одновременное поражение сопротивлений MCF7 и MDA-MB-231 гиперициновым ФДТ — гибридная терапия тамоксифена

Химические вещества и реагенты

RPMI 1640 без фенолового красного, l-глутамина, пенициллина / стрептомицина, трипсина, диметилсульфоксида (ДМСО), N -десметилтамоксифен (NDMTAM), 4-гидрокситамоксифен (NDMTAM), 4-гидрокситамоксифен (4-гидрокситамоксифен) (4-гидрокситамоксифен) тамоксифен HCl (ТАМ), ротенон (ROT), антимицин-A (ANTI-A), олигомицин (OLIGO), карбонилцианид 4- (трифторметокси) фенилгидразон (FCCP), монолаурат сорбитана полиэтиленгликоля (TWEEN 20), бычий сывороточный альбумин ( BSA), Triton X-100, тиазолиловый синий тетразолий бромид (MTT), ДНК-лестница 123 п.н., буфер для загрузки ДНК, кристаллический фиолетовый, бафиломицин A1, терминальная трансфераза (набор TdT), биотин-16-dUTP, анти-γ-тубулин и пируват натрия был приобретен у Sigma-Aldrich Norway AS (Осло, Норвегия).ProLong® Gold Antifade Reagent с / без DAPI, Image-iT® FX Signal Enhancer, блокирующий раствор BlockAid ™, реагент дцДНК Quant-iT ™ PicoGreen®, LIVE / DEAD ™, дитиотреитол, агароза TopVision, буфер для электрофореза 50 × TAE, стрептавидин- Конъюгат Alexa Fluor ™ 488, пентагидрат Hoechst 33258, MitoTracker® Deep Red FM и набор для визуализации перекисного окисления липидов Click-iT®-Alexa fluor® 488 были приобретены у Thermofisher Scientific (Waltham, MA, USA). GelRed ™ был приобретен Biotium Inc. (Хейворд, Калифорния, США).Все расходные материалы, относящиеся к анализатору Seahorse XF ^e 96, были приобретены у Seahorse Biosciences Europe (Копенгаген, Дания). Гиперицин (HYP, 99,3%) был получен от Planta Natural Products GmbH (Вена, Австрия). 17β-Эстрадиол (E2) был приобретен у Cayman Chemical Company (Анн-Арбор, Мичиган, США), Cremophor® EL был получен у BASF SE (Лимбургерхоф, Германия), аннексин V-FITC-конъюгированный был приобретен у ImmunoTools GmbH (Фризойт, Германия). ) и N- дезметилтамоксифен FITC (NDMTAM-FITC), приготовленный, как описано в другом месте ^24,57 был любезно подарен доктором.К. Яннакопулу, ИНН, НЦНИ «Демокритос».

Культура клеток

Для целей этого исследования мы выбрали линии клеток аденокарциномы молочной железы человека MCF7 и MDA-MB-231 (тройной отрицательный). Все клетки были первоначально получены из ATCC и выращены в RPMI 1640 без фенолового красного с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), пенициллина / стрептомицина при 37 ° C в 5% CO ₂ и 95% увлажненной атмосфере. Клетки инокулировали в 96-луночные планшеты (2 × 10 ⁴ клеток / 100 мкл среды / лунку), шестилуночные планшеты (1 × 10 ⁶ клеток / 2 мл среды / лунку), чашки Петри со стеклянным дном 35 мм. (Mattek Corp., 1 × 10 ⁵ клеток / 2 мл среды / чашку) за 24 часа до обработки или получения изображений с помощью конфокальной микроскопии.

Визуализация деконволюции живых клеток

Клетки MCF7 и MDA-MB-231 высевали на чашки со стеклянным дном 35 мм (Mattek Corp., 1 × 10 ⁵ клеток на чашку) за 24 часа до экспериментов. Затем клетки обрабатывали (i) 10 мкМ NDMTAM-FITC в течение 4 часов и (ii) 2 мкМ HYP 4 часа. Специфический флуоресцентный зонд субклеточных органелл для митохондрий (Mitotracker®-Deep Red) всегда добавляли к клеткам за 20 мин до визуализации в концентрации 150 нМ.Затем клетки промывали фосфатно-солевым буфером (PBS) и отображали в свежей 10% -ной эмбриональной сыворотке теленка, содержащей RPMI 1640.

Визуализацию выполняли на приборе OMX V4, оборудованном sCMOS-камерами и твердотельным источником света (GE Healthcare). . Система работала в режиме широкого поля для минимизации световой дозы. Были получены Z-стеки, покрывающие всю ячейку (расстояние по Z 125 нм). Изображения были развернуты и выровнены с помощью программного обеспечения Softworx (GE Healthcare).

Конфокальная микроскопия

Клетки высевали на стеклянное дно 35 мм чашек Петри (1 × 10 ⁵ клеток на чашку) за 24 ч до экспериментов.После обработки, фиксации, пермеабилизации и маркировки в соответствии с протоколом набора для визуализации перекисного окисления липидов Click-iT® клетки обрабатывали DAPI-содержащим антифадным реагентом Prolong® Gold (Life Technologies Inc.). Обработка 4-OHT в этом случае проводилась в течение ночи, а не после облучения, поскольку клетки фиксировали через 1 час после облучения и, следовательно, 4-часовая инкубация с 4-OHT после облучения была невозможна.

Клетки исследовали с помощью конфокального микроскопа Zeiss LSM 710 (Carl Zeiss MicroImaging GmbH, Йена, Германия), оснащенного многолинейным Ar-лазером (458/488/514 нм), DPSS-561 10 (561 нм), лазерным диод 405-30 CW (405 нм) и гелий-неоновый лазер (633 нм).Флуоресцентные изображения получали с помощью масляной иммерсии Zeiss plan-Apochromat × 63 NA / 1,4. Интенсивность измерялась, как описано в нашей предыдущей работе ⁵⁸ , с использованием Fiji 2.0 v1.51k и Igor Pro 6.36. Вкратце, интересующие области были определены с использованием фильтра дисперсии (ядро 8 пикселей), за которым следовали бинарный порог и процедура анализа частиц с Фиджи. Обработка изображений производилась с помощью Photoshop CS4 (Adobe, Mountain View, CA).

Исследования фототоксичности и облучение клеток

Обработка и облучение

Клетки инокулировали (20 × 10 ³ ) в 96-луночные планшеты и оставляли инкубироваться в полной среде, содержащей 10% FBS, в течение 24 часов.Затем клетки обрабатывали только средой, 4-OHT (15 мкМ, после облучения, если не указано иное), HYP (2 мкМ, 4 ч) и HYPERTAM (HYP и 4-OHT). Содержание ДМСО всегда поддерживалось ≤0,25%. После инкубации клеток с HYP в течение 4 ч все группы обработки дважды промывали. Клетки облучали с нижней стороны планшета с помощью лампы Lumisource (PCI Biotech AS, Осло, Норвегия) через фильтр длинного прохода с отсечкой 530 нм (Roscolab Ltd, Лондон, Великобритания) при интенсивности излучения 4 мВт / см ² .В экспериментах по комбинированной обработке 4-OHT (15 мкМ) снова добавляли ко всем подходящим группам клеток после облучения.

Оценка цитотоксичности

Окислительно-восстановительная способность всех групп клеток и темнового контроля оценивалась методом МТТ через 24 или 48 часов после облучения. В эти моменты времени результат анализа МТТ использовался для оценки жизнеспособности клеток. Анализ выполняли путем замены клеточной среды полной средой, содержащей 0,5 мг / мл МТТ, и инкубации при 37 ° C в увлажненной атмосфере с 5% CO ₂ в течение 3 часов.Затем среду МТТ отсасывали из всех клеток и полученные кристаллы формазана растворяли в 100 мкл ДМСО на лунку. Планшеты встряхивали 10 мин при ~ 300 об / мин. в орбитальном шейкере Heidolph Titramax 101 (Heidolph Instruments GmbH & Co.KG), и измерения конечной точки поглощения при 570 нм выполняли в планшет-ридере BioTek PowerWave XS2 (BioTek Instruments, Inc.). Контрольные значения, измеренные в лунках с ДМСО, и отсутствие клеток во всех случаях вычитали.

Анализ утечки ЛДГ

Клетки, засеянные в чашки Петри диаметром 35 мм (5 × 10 ⁵ ), инкубировали в полной среде, содержащей 10% FBS, в течение 24 часов.Затем клетки инкубировали с HYP (2 мкМ) в течение 4 ч, промывали, помещали в OPTIMEM (Life technologies, 2 мл / чашку), облучали, а затем добавляли 15 мкМ 4-OHT после облучения к группам комбинированной обработки. Через 6 ч после обработки клеточные среды (супернатанты) удаляли из всех групп клеток и помещали на лед. Контрольные клетки среды дополнительно промывали PBS, трипсинизировали и центрифугировали. Полученный осадок клеток ресуспендировали в 2 мл OPTIMEM, содержащем 0,25% Triton X-100, и перемешивали в течение 30 с.Полученная суспензия составила 100% контроль над смертью. Готовили реакционную смесь для анализа (pH = 7,4), содержащую 100 мМ трис-HCl, 0,4 мг / мл NADH и 20 мМ пируват натрия. Семьсот микролитров смеси добавляли к 700 мкл образца (все собранные супернатанты; среда-лизат контрольных клеток, который означал 100% гибель; только контроль OPTIMEM) в кювете на 1 мл с длиной светового пути 1 см. Кинетику распада поглощения при окислении НАДН до НАД ⁺ через превращение пирувата в L-молочную кислоту под действием ЛДГ в каждом случае отслеживали при 340 нм ( ε _{НАДН 340 нм} = 0.00622 л мкмоль ^-1 см ^-1 ), используя спектрофотометр Shimadzu UV-2550 UV-VIS (Shimadzu Corp.).

Клоногенные анализы

Четыре тысячи клеток были засеяны на 35 мм чашку Петри (три чашки на группу обработки) и через 24 часа были обработаны протоколами PDT и 4-OHT, как описано выше. 4-OHT удаляли из всех соответствующих групп обработки через 24 часа после облучения, и во все группы обработки добавляли свежую среду. Примерно через 2 недели (или когда колонии были оптимальными) клетки фиксировали этанолом в течение 10 минут и окрашивали кристаллическим фиолетовым (0.05%). Клетки промывали и подсчитывали окрашенные колонии, содержащие более 50 клеток.

ER knockdown

10 ⁵ клеток / лунку высевали в 12-луночный планшет для трансфекции на следующий день. Использовали пулы следующих миРНК Silencer Select (Invitrogen) s303873, n303876, s4826, s4827; 20 пмоль каждый, с агентом трансфекции RNAiMax (invitrogen), следуя инструкциям производителя.

Иммуноблоты

Клетки (~ 10 ⁶ ) собирали через 6 часов после облучения групп, обработанных носителем, 4-OHT (пост-облучение, 15 мкМ, 4 часа), HYP-PDT (2 мкМ, 4 часа ), или 4-OHT (после облучения) + HYP-PDT.Лизаты обрабатывали на гелях NuPage Bis Tris (LC3B) или Novex Tris Gly (ESR). Затем белки переносили из гелей на мембраны из PVDF (LC3B) или нитроцеллюлозы (ESR) с использованием системы переноса Trans-Blot® Turbo ™ (Bio-Rad Laboratories Inc.) (LC3B) или 50 мМ Трис, 380 мМ Gly, 0,1% SDS, 20% EtOH (СОЭ). Используемые антитела: LC3B 1: 2000 (CST 2775S), ESR2 1: 1000 (Invitrogen PA1-311), ESR1 1: 1000 (MA3-310), γ-тубулин 1: 20 000 (Sigma T6557). Сигналы детектировали с помощью системы визуализации ChemiDoc ™ MP, а интенсивность количественно определяли с помощью программного обеспечения Image Lab (Bio-Rad Laboratories Inc.).

Анализ перекисного окисления липидов

Мы провели исследования перекисного окисления липидов, используя детектор перекисного окисления липидов Click-iT® с линолеамидом-алкином (LAA; Life Technologies Inc.). Вкратце, клетки инкубировали совместно с 50 мкМ LAA и 4-OHT (ночь предыдущей ночью, 15 мкМ), HYP (2 мкМ) или 4-OHT в течение ночи + HYP в течение 4 часов, облучили и оставили на 1 час. . Окисление LAA привело к модификациям алкинов в нуклеофильных боковых цепях белков. Затем эти белки могут быть помечены азидом Alexa Fluor 488 с использованием катализируемой медью химии щелчков при фиксации клеток (4% формальдегид, 15 мин) и проницаемости (Triton X-100 0.5%, 10 мин). Следовательно, клетки изучали с помощью конфокальной флуоресцентной микроскопии (см. Выше).

Метаболические исследования

Для изучения изменений клеточного метаболизма при воздействии 4-OHT (15 мкМ), HYP (2 мкМ) и комбинации (4-OHT + HYP) с облучением и без него, мы использовали Анализатор Seahorse XF ^e 96 (Seahorse Bioscience, Копенгаген, Дания). Клетки, обработанные 4-OHT (в течение ночи), HYP (3 часа) или их комбинацией, меняли среду на базовую среду XF, минимальную DMEM (Seahorse Bioscience), с добавлением 10 мМ глюкозы, 2 мМ l-глутамина, 2 мМ пирувата натрия и корректировали. до pH 7.4. 4-OHT и HYP поддерживали в соответствующих группах, и клетки инкубировали в течение дополнительного часа при 37 ° C, 0% CO ₂ (всего 4 часа). Затем облучали соответствующие группы клеток, в то время как идентичный планшет использовали в качестве темного контроля. Базальное потребление кислорода и скорости закисления среды (OCR и ECAR соответственно) групп клеток измеряли в четырех циклах. Четыре угловых лунки оставили без клеток и использовали в качестве холостых значений. Они были автоматически вычтены программным обеспечением анализатора Seahorse.

Все полученные значения были нормализованы для каждой клеточной линии в соответствии с содержанием ДНК. После измерений с морским коньком 25 мкл Quant-iT ™ PicoGreen® добавляли к 6 мл буфера ТЕ (10 мМ Трис-HCl, 1 мМ ЭДТА, pH 7,5). Среду с морским коньком аспирировали и заменяли 50 мкл буфера пикогрин-ТЕ. Клетки инкубировали в течение 30 мин при 37 ° C, 5% CO ₂ , и измерения конечной точки флуоресценции считывали на микропланшетном ридере BioTek Synergy 2 ( λ _ex = 480 нм, λ _em = 525 нм).Контрольные значения были получены из лунок, в которых еще не было клеток, обработанных пикогрин-ТЕ, и их вычитали из значений всех групп клеток.

Анализ проточной цитометрии на апоптоз

Клетки MCF7 и MDA-MB 231 высевали в чашки Петри диаметром 60 мм (6 × 10 ⁵ на чашку) и оставляли на ночь при 37 ° C и 5% CO ₂ в увлажненной атмосфере. Затем клетки инкубировали только со средой или HYP (2 мкМ, 4 часа). Затем клетки дважды промывали PBS, а затем группы HYP-PDT и HYPERTAM облучали лампой Lumisource, как подробно описано ранее.Затем к группам 4-OHT и HYPERTAM добавляли 4-OHT (15 мкМ). Через 3, 8 и 24 часа клетки затем подвергали двум различным апоптотическим анализам проточной цитометрии для (A) аннексина V и (B) анализа TUNEL (8 и 24 часа).

1. А.

   Для окрашивания аннексином V клетки в трех выбранных временных точках обрабатывали трипсином и окрашивали в течение 30 минут аннексином V-FITC (5 мкл / мл) и LIVE / DEAD IR (1 мкл / мл) в соответствии с инструкциями производителей.Затем клетки промывали и ресуспендировали в PBS, содержащем Ca ²⁺ и Mg ²⁺ . Анализ проточной цитометрии проводили с использованием CytoFlex S (Beckman Coulter, Бреа, Калифорния, США) в общей сложности по 20 000 событий для каждого образца. Флуоресценцию FITC возбуждали при 488 нм и регистрировали через полосовой фильтр при 525/40 нм. Флуоресценцию LIVE / DEAD IR возбуждали на длине волны 638 нм, а эмиссию собирали через полосовой фильтр 780/60 нм.

2. Б.

   Для анализа TUNEL (мечение ник-концов терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы, биотина, dUTP) клетки сначала трипсинизировали в выбранные моменты времени и фиксировали ледяным (-20 ° C) метанолом в течение не менее 1 часа (100%, 1 мл). ). Затем клетки инкубировали в реакционной смеси TdT (фермент TdT 0,2 мкл, реакционный буфер TdT 5 мкл, CoCl ₂ 3 мкл, биотин-16-dUTP 0,5 мкл и DTT 0,5 мкл 10 мМ водного раствора, H ₂ О 40.8 мкл — 30 мин при 37 ° C), центрифугировали (500 × г , 5 мин), супернатант удаляли, осадки ресуспендировали и инкубировали в 4% сухой молочной суспензии, содержащей стрептавидин-AlexaFluor 488 (разведение 1:50, 0 ° C. , 30 минут). клетки снова центрифугировали и ресуспендировали в PBS, содержащем Hoechst 33258 (1,5 мкг / мл), в течение 30 мин, RT. Анализ проточной цитометрии выполняли с использованием LSRII (BD Biosciences, Франклин Лейкс, Нью-Джерси, США) до тех пор, пока не было достигнуто по крайней мере 10 000 событий для каждого образца. Флуоресценция AlexaFluor 488 возбуждалась при 488 нм и регистрировалась после длиннопроходного фильтра с отсечкой при 505 нм и полосового фильтра при 530/30 нм.Hoechst 33258 возбуждали на длине волны 355 нм, и излучение собирали после полосового фильтра 450/50 нм.

Все данные проточной цитометрии анализировали с использованием программного обеспечения FlowJo v.7.6.1 (Treestar Inc., Ashland, OR, США).

Исследования на животных

Для пилотного исследования HYPERTAM in vivo использовали домашних мышей с ослабленным иммунитетом NOD-scid Il2rγ ^null (NSG) самок. 2}} {2} \) после измерений каверномера дважды в неделю и сообщается как процентное изменение после лечение.Когда объем превышал 1000 мм ³ или у мышей проявлялись клинические признаки кахексии и / или потери веса более 20%, их умерщвляли смещением шейных позвонков под общей анестезией. Животным позволяли есть и пить воду без ограничений, в то время как для эстроген-зависимых опухолей MCF7 в воду добавляли эстрадиол (E2) в концентрации 6,25 мкг / мл.

Для исследований на животных использовали шесть групп мышей: контрольные мыши (CTRL), которым не вводили никаких лекарств или подвергались облучению, мыши HYP dark (HD), которым вводили полную дозу HYP, но не подвергались воздействию света, Только ТАМ (ТАМ), которым вводили полную дозу тамоксифена, HYP и ТАМ темный (HTD), которым вводили полные дозы HYP и ТАМ, но не свет, группа HYP-PDT (HL), которым вводили ФДТ, а затем подвергали воздействию света 2 часа позже, и, наконец, HYP-PDT + TAM, которым вводили HYP, подвергали воздействию света через 2 часа, а затем вводили TAM.Каждая группа мышей содержала по крайней мере пять мышей, в то время как группы, представляющие особый интерес (HL и HTL), содержали шесть или семь мышей.

На основании предварительных токсикологических исследований и исследований ФДТ (данные не представлены) оптимальный режим лечения был определен следующим образом: 12,5 мг / кг HYP вводили внутрибрюшинно за 2 часа до облучения (40 Дж / см ² ) с помощью лампы PDT. . После PDT группы HTD, TAM и HTL также получали по одной внутрибрюшинной дозе. болюс 200 мг / кг ТАМ. Составы как HYP, так и ТАМ были получены путем начального растворения в кремофоре (15%) и последующего диспергирования в воде (85%).Животных анестезировали во время процесса ФДТ с использованием газовой анестезии (севофлуран), в то время как все другие участки кожи, кроме опухоли с периферическим краем 1-2 мм, были надлежащим образом защищены от света. Все эксперименты на животных проводились в соответствии с институциональными, национальными и европейскими руководящими принципами и правилами и после одобрения институциональным наблюдательным советом Радиевой больницы (номер заявки: 7489).

Сводка отчетов

Дополнительная информация о дизайне исследования доступна в Сводке отчетов по исследованиям природы, связанной с этой статьей.

GLS Большой роскошный внедорожник | Мерседес-Бенц США

Как загрузить и установить MB-System

Общие инструкции

Сценарий настройки был сгенерирован с использованием пакета autoconf. Текущий сценарий настройки не разрешает все флаги и местоположения, необходимые для сборки MB-System на всех платформах, но позволяет гибкую установку, создание и использование разделяемых библиотек без необходимости интерактивного редактирования.Эти улучшения делают дистрибутивы MB-System более удобными для включения в такие системы менеджеров пакетов, как Debian и Homebrew. Мы надеемся улучшить сценарий настройки, чтобы не требовалось меньше вмешательства.

Основные шаги для построения MB-системы с использованием сценария настройки:

1. Перейти в верхнюю часть каталога распространения MB-System:

компакт-диск MB-System-5.7.8

2. Запустите сценарий настройки, чтобы сгенерировать файлы Makefile по всей структуре каталогов распространения.Параметры командной строки для настройки обсуждаются ниже.

[… предварительные параметры…] ./ настроить [… параметры…]

3. Запустите утилиту make, чтобы собрать программное обеспечение в исходном дистрибутиве.

марка

4. Запустите служебную программу make с параметром install, чтобы установить программное обеспечение в целевое расположение, указанное при запуске configure. На этом шаге библиотеки, программы, сценарии, справочные страницы и веб-страницы копируются в целевые места назначения.

сделать установку

Сценарий configure предназначен для распознавания среды, поиска необходимых пакетов и создания файлов сборки с минимальным вмешательством пользователя. На практике пользователям обычно необходимо установить по крайней мере некоторые параметры при использовании сценария настройки для успешной сборки, установки и запуска MB-System. Если установки NetCDF и GMT не могут быть обнаружены, MB-System не может быть построена. Если не удается найти FFTW3, Motif или OpenGL, будет создана MB-System, но без приложений, зависящих от этих пакетов.

В зависимости от того, как установлены права пользователя в вашей системе и где должен быть установлен пакет, может потребоваться выполнить некоторые или все вышеперечисленные команды с привилегиями суперпользователя. В старых стилях Unix и Linux это обычно выполнялось с помощью команды su, чтобы стать пользователем root или суперпользователем, шаг, который требует знания пароля root для системы. После успешного вызова su в командной оболочке все команды имеют привилегии суперпользователя. В MacOS X и других «современных» разновидностях Unix и Linux чаще всего используется команда sudo перед другими командами, чтобы выполнять их с привилегиями суперпользователя.Пароль администратора требуется для первого экземпляра sudo, но не для последующих экземпляров (по крайней мере, на период времени, обычно пять минут). В этом случае команды становятся:

sudo ./configure
sudo make
sudo make install

Назначением по умолчанию является / usr / local, поэтому следует найти исполняемые программы и сценарии MB-System в / usr / local / bin, общие библиотеки в / usr / local / lib, справочные страницы в / usr / local / man, а также базы данных projection и Levitus, к которым обращается MB-System, в / usr / local / share / mbsystem.Тем не менее, можно управлять местом установки скрипта configure в командной строке с помощью аргумента «–prefix». Например, чтобы установить MB-System в / Users / caress / sandbox / mbsystem, вы можете использовать:

sudo ./configure
‐‐prefix = / Users / caress / sandbox / mbsystem

Полный список вариантов установки configure:

--prefix
Это общий префикс установки для всех файлов.
Если для exec_prefix задано другое значение, префикс
используется только для файлов, не зависящих от архитектуры.
[По умолчанию: / usr / local]

--exec_prefix
Префикс установки для архитектурно-зависимых файлов.
По умолчанию это то же самое, что и префикс. Вам следует избегать
установки чего-либо непосредственно в exec_prefix. Однако значение
по умолчанию для каталогов, содержащих
архитектурно-зависимых файлов, должно быть относительно
exec_prefix.
[по умолчанию: $ {prefix} ==> / usr / local]

--datarootdir
Корень дерева каталогов для файлов данных, независимых от архитектуры, доступных только для чтения.
[по умолчанию: $ {exec_prefix} / share ==> / usr / local / share]

--bindir
Каталог для установки исполняемых файлов, запускаемых пользователями.
[по умолчанию: $ {exec_prefix} / bin ==> / usr / local / bin]

--libdir
Каталог для установки библиотек объектного кода.
[по умолчанию: $ {exec_prefix} / lib ==> / usr / local / lib]

--includedir
Каталог для установки файлов заголовков C.
[по умолчанию: $ {exec_prefix} / include ==> / usr / local / include]

MB-System зависит от библиотек из ряда различных пакетов, включая NetCDF, GMT5, GDAL, FFTW3, X11 и Motif.Иногда пользователю доступно более одной установки пакета, и желательно указать, какой из них используется. Кроме того, к сожалению, скрипт настройки не всегда успешно находит все необходимые пакеты. Следовательно, сценарий configure позволяет пользователям при необходимости устанавливать местоположения в командной строке. Параметры командной строки configure, управляющие расположением необходимых компонентов:

--with-netcdf-config
Расположение сценария конфигурации NetCDF nc-config

‐‐with-gdal-config
Расположение скрипта конфигурации GDAL gdal-config

‐‐with-gmt-config
Расположение скрипта конфигурации GMT gmt-config

‐‐with-proj-lib
Расположение библиотек PROJ

‐‐with-proj-include
Расположение библиотеки PROJ

‐‐with-fftw-lib
Расположение библиотек FFTW3 (необязательно)

‐‐with-fftw-include
Расположение заголовков FFTW3 (необязательно)

‐‐with-x11-lib
Расположение библиотек X11 (необязательно)

‐‐with-x11-include
Расположение заголовков X11 (необязательно)

‐‐with-motif-lib
Расположение библиотек Motif (необязательно)

‐‐with-motif-include
Расположение заголовков Motif (необязательно)

‐‐with-opengl-lib
Расположение библиотек OpenGL (необязательно)

‐‐with-opengl-include
Расположение заголовков OpenGL (необязательно)

‐‐with-otps-dir
Место установки OTPS (дополнительно)

Обратите внимание, что спецификация FFTW3, Motif и OpenGL не является обязательной.Если сценарий настройки не находит эти пакеты и пользователь не указывает их расположение, то некоторые программы MB-System не будут построены. Отсутствие FFTW3 означает, что mbsegypsd не собирается. Отсутствие OpenGL приводит к тому, что программы визуализации mbgrdviz и mbeditviz не создаются. Отсутствие Motif означает, что графические программы любого типа не создаются.

Настройка среды пользователя

Независимо от того, где установлены программы MB-System, пользователи должны включить это местоположение в переменную среды пути, чтобы запускать программы из командной строки.Если MB-System была установлена ​​с помощью диспетчера пакетов или вручную в обычном месте (например, / usr / local / bin), путь пользователя, вероятно, уже ссылается на необходимое расположение. Если требуется изменить переменную пути пользователя, это можно сделать путем редактирования файлов инициализации, скрытых в домашнем каталоге пользователя. Какие файлы необходимо редактировать, зависит от того, какая оболочка командной строки используется. Если пользователь работает с csh , необходимо изменить файлы .cshrc и .login .Если оболочка — bash , необходимо изменить файлы .bashrc и .profile . См. Страницы руководства для соответствующей программы оболочки, чтобы определить, как установить среду пользователя. Исполняемый файл perl также должен быть доступен в пути пользователя для работы большинства макросов.

Подключаемые модули GMT mbcontour, mbswath и mbgrdtiff вызываются как модули программы gmt:

gmt mbcontour (… .различные аргументы… ..)
gmt mbswath (….различные аргументы… ..)
gmt mbgrdtiff (… .различные аргументы… ..)

Для того, чтобы GMT успешно выполнял модули MB-System, местоположение разделяемых библиотек, содержащих динамически загружаемые модули, должно быть известно GMT. Это можно сделать, установив параметр GMT_CUSTOM_LIBS в файле gmt.conf, который является частью установки GMT, установив этот параметр в файле gmt.conf в домашнем каталоге пользователя, или используя модуль GMT gmtset для изменения этого параметр в текущем рабочем каталоге.Модули MB-System GMT включены в файл общей библиотеки с именем mbsystem.so, который устанавливается в том же месте, что и обычные общие библиотеки MB-System (например, libmbio), обычно это расположение, такое как / usr / local / lib. . Если mbsystem.so был установлен в / usr / local / lib, то параметр GMT_CUSTOM_LIBS в файле gmt.conf может иметь значение:

GMT_CUSTOM_LIBS = /usr/local/lib/mbsystem.so

Для модулей параллельной обработки mbm_multiprocess, mbm_multidatalist и mbm_multicopy требуется модуль Perl Parallel :: ForkManager.Его можно добавить в вашу локальную установку Perl с помощью утилиты командной строки cpan:

cpan Параллельный :: ForkManager

Макросы построения MB-System mbm_grdplot, mbm_plot и т. Д. Все генерируют сценарии оболочки, которые, в свою очередь, выполняют комбинацию GMT, MB-System и других программ для создания и последующего отображения графиков или изображений PostScript. По умолчанию эти сценарии используют системные приложения по умолчанию для просмотра постскриптумов или изображений, которые различаются в зависимости от операционных систем и дистрибутивов.Если у вас есть определенные программы, которые вы хотите использовать для отображения файлов и изображений postscript на экране, это можно настроить с помощью программы MB-System mbdefaults. Если, например, вы хотите использовать «gv» для отображения постскриптума и «feh» для отображения изображений, запустите:

mbdefaults -Dgv -Ifeh -V

Эти значения по умолчанию хранятся в скрытом файле с именем «.mbio_defaults» в домашнем каталоге пользователя. Чтобы удалить персональные настройки для средств просмотра файлов и вернуться к системным настройкам по умолчанию, удалите файл «.mbio_defaults ”или запустите:

mbdefaults -DDefault -IDefault -V