Ифнс поиск организации по инн: Реестры и проверка контрагентов | ФНС России

Название компании, адрес, телефон, сайт, домен, ФИО руководителя, совладельца, доверительного управляющего, ИНН, ОГРН, ОКПО, БИК

Зачем существует ИНН

Идентификация налогоплательщиков как физических, так и юридических лиц, введена в 1993 году. Вслед за мировыми практиками в России было решено сделать прозрачным учет плательщиков налогов в государстве и облегчить работу налоговых органов.

Идентификатор присваивается организации или физическому лицу один раз и на все время существования. Этот номер является неотъемлемым признаком налогоплательщика и в любой момент может подтвердить его идентичность. Например, при наличии нескольких компаний с одинаковым наименованием, не исключена их регистрация по одному адресу, но исключено наличие у двух предприятий одного идентифицирующего признака. Поэтому поиск по ИНН юридического лица стал сегодня первым шагом в проверке контрагента на реальность ведения хозяйственной деятельности.

Где можно узнать ИНН организации

Итак, одним из обязательных пунктов проверки контрагента является необходимость удостовериться, что организация является зарегистрированной в установленном законом порядке и на дату заключения сделки не ликвидирована или не признана банкротом. Иными словами, задача найти организацию по ИНН – это та ежедневная практика, которую осуществляет практически каждый бизнес.

Поэтому очень удобно, что вся информация о ИНН находится в открытом доступе.

Есть несколько способов узнать ИНН:

• на сайте ФНС (ЕГРЮЛ/ЕГРИП)
• в едином федеральном реестре, содержащем информацию о деятельности юридических лиц и индивидуальных предпринимателей (Федресурс)
• в СПАРКе

Как узнать ИНН организации

Рассмотрим подробнее процедуру поиска организации по ИНН и идентификацию физического лица по этому номеру.

На сайте ФНС в разделе «Узнать ИНН» вам будет предложено заполнить поля с ФИО, датой рождения физического лица, номер документа, удостоверяющего личность, его серию, номер и дату выдачи документа, а также цифры с картинки, после чего система выполнит поисковый запрос и покажет результаты.

На сайте https://egrul.nalog.ru/ выберите вкладку «Юридическое лицо» или «Индивидуальный предприниматель/КФХ» и введите ОГРН или наименование юридического лица и регион местонахождения, а также заполните поле с цифрами с картинки. В качестве результата вы получите справку с указанием регистрационных данных, сведениях о юридическом адресе и других идентификационных кодах юридического лица или ИП.

По сути, основным инструментом для поиска любой информации в СПАРКе является строка поиска – сюда можно вбить название интересующей организации или любой из кодов или ФИО индивидуального предпринимателя. Поиск контрагента по ИНН в СПАРКе не составит труда.

Выбрав интересующую вас организацию и перейдя в карточку компании, вы сможете узнать ИНН в блоке с регистрационными данными. Таким образом, ваш поиск будет осуществлён всего в один клик!

ИНН также можно увидеть в разделе «Регистрационные данные»:

Читайте также:

Как найти организацию по ИНН

В современных условиях ведения бизнеса нужно особо тщательно подходить к информации о возможном будущем партнере. Зачастую примерно на 90% вся бухгалтерия предприятия компьютеризирована, в том числе и проведение платежей.

Нередко руководители фирм скрепляют договора с партнерами, имея на руках лишь непроверенную информацию от самого потенциального партнера по бизнесу, что иногда приводит к финансовым потерям.

В настоящее время в нашей стране ведется единый государственный реестр юридических лиц, благодаря чему можно в короткие сроки получить справку об интересующей фирме в режиме онлайн. Это возможно сделать как на государственных электронных ресурсах, так и на частных.

Для чего нужно проверять фирму по ИНН

О потенциальном деловом партнере необходимо своевременно получить достоверный материал для того, чтобы предотвратить материальные потери своей компании.

В основном такая необходимость возникает перед вступлением в правоотношения путем подписания договоров. По номеру можно получить следующую информацию об учреждении:

• Удостовериться в том, что компания действительsно существует;
• Узнать об актуальности деятельности юридического лица, не прекращена ли она, не является ли предприятие банкротом и т.д.;
• Найти данные о виде деятельности фирмы по ОКВЭД. Такие сведения указывают при регистрации в местных налоговых органах.
• Материал о руководителе компании. Уполномочено ли лицо, присутствующее при совершении сделки, подписывать договор.

Благодаря тому, что сведения о предприятиях собранны на специализированных интернет-ресурсах, найти организацию по ИНН не представляется сложной задачей.

Для этого необходимо воспользоваться услугами одного из таких сайтов, заполнив требуемые строки для поиска.

В основном достаточно указать только ИНН искомой фирмы, так как это — идентификационный номер, который присваивается только лишь одной компании, в результатах поиска не будет двоякого заключения.

Кроме того, некоторые ресурсы могут запросить ввод кода с картинки (капчи), это нужно для подтверждения, что запрашивающий справку является человеком, а не компьютерной программой.

Из вышесказанного видно, что, обладая только идентификационным номером, можно узнать всё необходимоё о потенциальном партнере.

Как найти организацию по ИНН

Одним из самых простых способов найти организацию по ИНН является использование баз данных интернет-сервисов. Одним из таких является сайт федеральной налоговой службы РФ — nalog.ru.

Чтобы проверить фирму, необходимо зайти на сайт ФНС РФ, выбрать для этого специальный раздел и ввести в поисковую форму номер искомого предприятия.

Помимо государственных сервисов, в сети интернет существует несколько частных сайтов, с помощью которых за небольшую плату возможно найти организацию по ИНН, а также узнать о деятельности этой фирмы, её руководителе и отзывы.

Вся эта информация необходима для принятия взвешенного решения о том, стоит ли вступать в какие-либо правоотношения с выбранным деловым партнером. Потраченное время на поиск данных о потенциальном партнере в дальнейшем принесет свои плоды.

Кроме того, современные онлайн-сервисы делают такой поиск легковыполнимой задачей для любого пользователя. Имея на руках подобную справку можно обезопасить свою компанию от непредвиденных убытков.

Что можно узнать по ИНН

Располагая лишь только номером интересующего учреждения, на специализированных сервисах можно получить узнать следующее:

• Достоверное название и юридическую форму собственности фирмы;
• Юридический адрес регистрации предприятия;
• Корреспондентский счет;
• Дату регистрации компании;
• Сведения об ОКВД и ОГРН;
• Дату прекращения деятельности предприятия, если это произошло.

Кроме того, существует возможность получить дополнительные сведения. Обычно для этого нужно будет заплатить небольшую сумму при составлении подобного запроса.

После оплаты будет предоставлен файл для загрузки с выпиской всех имеющихся сведений об искомом учреждении.

Иные способы проверки организации по ИНН

Помимо использования официального онлайн-сервиса ФНС РФ, существуют и другие методы сбора данных о предприятии.

1. Найти организацию по ИНН возможно в поисковых системах. В поисковую строку необходимо ввести номер учреждения и просмотреть многочисленные результаты поиска, которые выдаст система. Кроме номера можно ввести и другие данные о компании, которые уже известны. Данный способ занимает немало времени и малоэффективен.

2. Узнать о предприятии можно в государственном реестре юридических лиц. Такой реестр, согласно пунктам нормативно-правовых актов, обязан предоставить сведения об организации, её учредителях, юридическом и фактическом адресе по первому требованию.

3. В налоговой службе также обязаны предоставить информацию об учреждении, для этого можно воспользоваться их официальным сайтом. Кроме того можно оформить платный запрос на выписку из ЕГРЮЛ, которая будет предоставлена в письменном виде. Эту процедуру можно ускорить, но за это придется доплатить.

При выборе способа следует учитывать, что официальные государственные источники гарантируют достоверность предоставляемых фактов и несут ответственность за ошибки, допущенные в них.

Некоторые частные коммерческие ресурсы, а также поисковые системы никакой ответственности за недостоверность не несут.

Получить выписку об организации

Следует помнить, что ФНС согласно требованиям действующего законодательства не имеет права выводить информацию о фирме на монитор.

Поэтому ответ на заявку о выписке об учреждении из ЕГРЮЛ будет дан в письменной форме либо в виде файла на электронную почту. Также при обращении в суд для урегулирования каких-либо конфликтных ситуаций с любой организацией потребуется предоставить выписку в письменной форме заверенную в государственных органах.

Согласно нормативно-правовым актам нашего государства, информация, предоставляемая при постановке на учет компании, является открытой, поэтому налоговые органы предоставляют эти сведения на законных основаниях.

Получить такие данные можно непосредственно по месту регистрации фирмы. Существует одна особенность при запросе выписки об организации: если необходима справка о собственной компании, то она предоставляется бесплатно; если же требуется получиться выписку о любом другом учреждении, то эта услуга является платной.

На сегодняшний день получение информации о компании не представляет никакой сложности как при обращении в налоговые органы по месту регистрации, так и при использовании онлайн-сервисов.

Другие полезные статьи:

Не стоит пренебрегать этой возможностью при заключении договор с возможными партнерами. Собранные сведения будут способствовать снижению рисков при дальнейшей совместной деятельности.

Похожие статьи:

Проверка ФН и ККТ на наличие внесения в реестр в ФНС

Чтобы проверить, что фискальный накопитель внесен в реестр ФНС рекомендуем:

1. Перейти на сайт налоговой по проверке ФН https://kkt-online.nalog.ru/ 

2. Выбрать модель фискального накопителя(модель ФН указывается в паспорте ФН)

3.Ввести заводской номер фискального накопителя. Заводской номер фискального накопителя можно взять из следующих источников:

• Заводской номер фискального накопителя указан на паспорте ФН
• Заводской номер фискального накопителя печатается на чеке
• Заводской номер фискального накопителя отображается на смарт-терминале в разделе «Настройки-Обслуживание кассы»
• Заводской номер фискального накопителя указан на этикетке, которая наклеена на паспорт смарт-терминала 

Положительным результатом является ответ системы «ФН включен в реестр, не зарегистрирован в налоговых органах».

Если получен следующий ответ «ФН не включен в реестр, не зарегистрирован в налоговых органах», то следует:

1. Сверить заводской номер ФН в паспорте ФН и на смарт-терминале в разделе «Настройки-Обслуживание кассы»
2. Если номер ФН совпадает, то следует направить обращение в поддержку с приложенным фото паспорта ФН и фото из раздела «Настройки-Обслуживание кассы»

 Чтобы проверить, что ККТ внесена в реестр ФНС нужно:

1. Перейти на сайт налоговой по проверке ККТ: https://kkt-online.nalog.ru/ 

2. Выбрать модель ККТ(модель указана в паспорте смарт-терминала)

• Модель 7.2 в реестре называется СТ2Ф
• Модель 7.3 в реестре называется СТ3Ф
• Модель 10 в реестре называется СТ3Ф
• Модель 5 в реестре называется СТ5Ф

3. Ввести заводской номер ККТ

4. Нажать на кнопку «Проверить»

 Положительным результатом является ответ системы «ККТ включена в реестр, не зарегистрирована в налоговых органах».

Если получен следующий ответ «ККТ не включена в реестр, не зарегистрирована в налоговых органах», то следует:

1. Сверить заводской номер ККТ в паспорте и на смарт-терминале в разделе «Настройки-Обслуживание кассы»
2. Если номер ККТ совпадает, то следует направить обращение в поддержку с приложенным фото паспорта и фото из раздела «Настройки-Обслуживание кассы»

API сервис ФНС nalog.ru

Федеральная налоговая служба. API доступ к базе данных ФНС.

— Проверь себя и контрагента. Доступ к ЕГРЮЛ и ЕГРИП. Сведения о государственной регистрации юридических лиц, индивидуальных предпринимателей, крестьянских (фермерских) хозяйств (получение сведений из ЕГРЮЛ и ЕГРИП в электронном виде)
— Узнать ИНН. Сведения об ИНН физических лиц
— Сведения о действительных ИНН юридических лиц, недействительных свидетельствах ИНН, недействительных ИНН физических и юридических лиц
— Единый реестр субъектов малого и среднего предпринимательства
— Открытые и общедоступные сведения ЕГРН об иностранных организациях
— Поиск сведений в реестре дисквалифицированных лиц
— Система информирования банков о состоянии обработки электронных документов (311-П, 440-П)
— Сведения о физических лицах, являющихся руководителями или учредителями (участниками) нескольких юридических лиц
— Адреса, указанные при государственной регистрации в качестве места нахождения несколькими юридическими лицами
— Сведения о юридических лицах, имеющих задолженность по уплате налогов и/или не представляющих налоговую отчетность более года
— Сведения о юридических лицах и индивидуальных предпринимателях, в отношении которых представлены документы для государственной регистрации
— Запрос о направлении информации о факте представления в налоговый орган документов при государственной регистрации юридического лица или индивидуального предпринимателя
— Сведения о лицах, в отношении которых факт невозможности участия (осуществления руководства) в организации установлен (подтвержден) в судебном порядке
— Юридические лица, в состав исполнительных органов которых входят дисквалифицированные лица

На данной странице вы можете протестировать работу сервиса API для получения информации с nalog.ru (https://www.nalog.ru/rn77/about_fts/el_usl/). Сервис работает через http запросы, без капчи. В ответ на каждый запрос вы получаете JSON с нужной информацией.

Сервис предоставляет вам более удобный способ взаимодействия с информацией, находящей в открытом доступе, автоматически обрабатывая запросы к nalog.ru.

Для подключения к API сервису nalog.ru, пишите на [email protected] или заполните форму обратной связи.

ФНС РОССИИ, ИНН 7707329152

Основание внесения оператора в реестр (номер приказа): 59

Адрес местонахождения оператора: 127381, Москва, ул. Неглинная, д. 23

Дата начала обработки персональных данных: 01.01.2001

Субъекты РФ, на территории которых происходит обработка персональных данных: Москва

Цель обработки персональных данных: реализации служебных и трудовых отношений, а также в связи с оказанием государственных услуг и осуществлением государственных функций

Описание мер, предусмотренных ст. 18.1 и 19 Закона: Применяемые в составе ИС налоговых органов средства обработки информации не ниже пятого класса защиты. Программно-аппаратные средства межсетевого экранирования, применяемые для разграничения сегментов внутри ИС налоговых органов, не ниже четвертого класса защиты, а предназначенные для подключения к информационно-телекоммуникационным сетям международного информационного обмена (включая сеть Интернет) удовлетворяют требованиям ФСБ России. Исполнительный механизм в совокупности с механизмом поддержки Системы защиты информации на физическом подуровне обеспечивают создание защищенной физической оболочки для объектов информатизации налоговых органов. Исполнительный механизм Системы защиты информации в совокупности с механизмом поддержки на технологическом подуровне исполнительского уровня обеспечивают создание защищенной программной и аппаратной оболочки для ИС ФНС России (защищенной платформы ИС налоговых органов). На этом подуровне обеспечивается: защита ИР ФНС России, содержащих системное и прикладное программное обеспечение, необходимое для работы ИС налоговых органов, защита Инфраструктурных ИР ФНС России, содержащих сведения по администрированию ИС налоговых органов. Исполнительный механизм в совокупности с механизмом поддержки Системы защиты информации на пользовательском подуровне должны обеспечить допуск к работе в ИС налоговых органов только авторизованных пользователей (принцип «свой – чужой») и создание защитной оболочки вокруг элементов ИС налоговых органов (рабочие станции, серверы) и индивидуальной среды деятельности каждого пользователя. На этом подуровне обеспечивается: защита Инфраструктурных и Технологических ИР ФНС России, содержащих имена, пароли и другую идентификационную информацию пользователей ИС налоговых органов, защита ИР, составляющих государственную тайну, Конфиденциальных и Открытых ИР ФНС России, содержащих защищаемую информацию, защита информационных процессов программного обеспечения. Исполнительный механизм Системы защиты информации в совокупности с механизмом поддержки Системы защиты информации на сетевом (локальном) подуровне исполнительского уровня СОБИ должны обеспечивать разделение ИР ФНС России и средств их обработки на сегменты, создание надежной защищенной оболочки по периметру сегментов, организацию защищенного обмена информацией между сегментами, а также ограничение числа точек взаимодействия (точек входа/выхода) сегментов между собой. На этом подуровне обеспечивается: защита Инфраструктурных ИР, содержащих адресную информацию ИС налоговых органов (скрытие топологии ИС налоговых органов), защита Инфраструктурных ИР ФНС России, содержащих имена узлов телекоммуникационной инфраструктуры, пользователей, пароли доступа и другую идентификационную информацию), защита информации, обрабатываемой в выделенных сегментах ИС налоговых органов и скрытие их топологии, защита ИР, составляющих государственную тайну, Конфиденциальных и Открытых ИР ФНС России, содержащих защищаемую информацию, защита информационных процессов программного обеспечения. Исполнительный механизм в совокупности с механизмом поддержки Системы защиты информации на канальном подуровне обеспечивают создание надежной защитной оболочки по внешнему периметру ИС налоговых органов и организацию защищенного межведомственного обмена информацией с другими органам государственной власти, а также защищенного обмена информацией с удаленными и мобильными пользователями ИС налоговых органов и, при необходимости, с внешними пользователями. На этом подуровне обеспечивается: защита и скрытие трафика в каждом из каналов его распространения, защита информации, передаваемой по каналам связи.

Категории персональных данных: фамилия, имя, отчество,год рождения,месяц рождения,дата рождения,место рождения,адрес,семейное положение,социальное положение,имущественное положение,образование,профессия,доходы,национальная принадлежность, сведения составляющие налоговую тайну, имеют специальный режим хранения и доступа, сведения о воинском учете военнообязанных лиц и лиц, подлежащих призыву на военную службу, сведения о полученном профессиональным и дополнительном образовании, профессиональной переподготовке, повышении квалификации, стажировке, присвоении ученой степени, ученого звания (наименование образовательного учреждения, специальность и квалификация по документу об образовании, наименование документа об образовании, его серия и номер), сведения о трудовой деятельности (трудовая книжка (номер, серия и дата выдачи трудовой книжки (вкладыша) и сведения, содержащиеся в трудовой книжке об общем трудовом и страховом стаже), сведения о состоянии здоровья и его соответствия выполняемой работе (заключение медицинского учреждения о наличии (отсутствии) заболевания, препятствующего поступлению на государственную гражданскую службу или ее прохождению), номер и серия страхового свидетельства обязательного пенсионного страхования, номер и серия полиса обязательного медицинского страхования, сведения о доходах, расходах, имуществе, обязательствах имущественного характера, а также о доходах, расходах, имуществе, обязательствах имущественного характера супругов и несовершеннолетних детей, сведения о государственных и ведомственных наградах, почетных и специальных званиях, поощрениях (в том числе и наименование или название награды, звания или поощрения, дата и вид правового акта о награждении или дата поощрения), результаты аттестации и квалификационного экзамена государственного гражданского служащего, сведения о временной нетрудоспособности, а также номер и серия листка нетрудоспособности (утвержден приказом Министерства и здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 26 апреля 2011 г. № 347н (зарегистрировано Минюстом России 10 июня 2011 г. № 21026), табельный номер (форма № Т-1, утверждена постановлением Госкомстата России от 5 января 2004 г № 1), анкета, наличие (отсутствие) судимости, наличие социальных льгот, документы, связанные с оформлением допуска к сведениям, составляющим государственную или иную охраняемую законом тайну, сведения о дополнительных доходах, имуществе и обязательствах имущественного характера, реквизиты и содержание служебного контракта, номера телефонов (домашний, мобильный), адрес электронной почты, пол, гражданство, фотография.

Категории субъектов, персональные данные которых обрабатываются: к сотрудникам ФНС России, налогоплательщиков, граждан, обращающихся в ФНС России с жалобами и заявлениями, кандидаты на замещение вакантных должностей гражданской службы РФ, бывшие государственные гражданские служащие, родственники государственных гражданских служащих, представители контрагентов, пользователи сайта.

Перечень действий с персональными данными: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечения персональных данных.

Обработка персональных данных: смешанная,с передачей по внутренней сети юридического лица,с передачей по сети Интернет

Правовое основание обработки персональных данных: Федеральным законом Российской Федерации от 27 июля 2006 г. № 152-ФЗ «О персональных данных», — Федеральный закон от 02.05.2006 № 59-ФЗ «О порядке рассмотрения обращений граждан Российской Федерации», — Федеральный закон от 27.07.2004 № 79-ФЗ «О государственной гражданской службе Российской Федерации», Указ Президента РФ от 01.02.2005№ 112 «О конкурсе на замещение вакантной должности государственной гражданской службы Российской Федерации»,- Постановлением Правительства Российской Федерации от 01.11.2012 № 1119 «Об утверждении Требований к защите персональных данных при их обработке в информационных системах персональных данных», — Рекомендациями ФСТЭК России от 15 февраля 2008 г. по обеспечению безопасности персональных данных при их обработке в информационных системах персональных данных, — Приказом ФСБ России от 10 июля 2014 г. № 378 «Об утверждении состава и содержания организационных и технических мер по обеспечению безопасности персональных данных при их обработке в информационных системах персональных данных с использованием средств криптографической защиты информации, необходимых для выполнения установленных правительством Российской Федерации требований к защите персональных данных для каждого из уровней защищенности», — «Базовой моделью угроз безопасности персональных данных при их обработке в информационных системах персональных данных», утвержденной заместителем директора ФСТЭК России 15 февраля 2008 года, — Приказом ФСТЭК России от 18.02.2013. № 21 «Об утверждении Состава и содержания организационных и технических мер по обеспечению безопасности персональных данных при их обработке в информационных системах персональных данных» (Зарегистрировано в Минюсте России 14 мая 2013 г. № 28375), — Концепцией информационной безопасности Федеральной налоговой службы (утв. приказом Федеральной налоговой службы от 13 января 2012 г. № ММВ-7-4/6@, изм. Приказом Федеральной налоговой службы от 26 мая 2015 г. № ПА-7-6/213@), Перечень лицензий ФСБ России: — Лицензия на предоставление услуг в области шифрования информации, — Лицензия на осуществление распространения шифровальных (криптографических) средств, — Приказом ФНС России от 21.04.2015 №ММВ-7-4/165@ «О мерах, направленных на реализацию постановления Правительства РФ от 21.02.2012 № 211», — Лицензия на осуществление технического обслуживания шифровальных (криптографических) средств, согласие кандидата на вакантную должность, согласие государственного гражданского служащего.

Наличие трансграничной передачи: нет

Сведения о местонахождении базы данных: Россия

Как получить выписку из ЕГРИП

Единый государственный реестр индивидуальных предпринимателей содержит сведения обо всех индивидуальных предпринимателях России.

Ольга Макеева

юрист

Реестр ведет Федеральная налоговая служба с 1 июля 2002 года на бумажном и электронном носителях. Если данные не совпадают, преимущество имеет информация на бумажном носителе.

Сведения в реестре открыты и общедоступны, за исключением некоторых персональных данных и ограничений, которые может устанавливать правительство РФ. Например, номера паспортов предоставляются только госорганам по специальному запросу.

ст. 4 ФЗ о госрегистрации юрлиц и ИП

Информацию можно получить в виде выписки из ЕГРИП. Обычно это многостраничный документ. Также можно оформить доступ ко всему ЕГРИП. Такой услугой пользуются организации, которым нужно часто обращаться к содержанию госреестра.

п. 1 ст. 6 ФЗ о госрегистрации юрлиц и ИП

Какие бывают

Выписки из ЕГРИП бывают электронные и бумажные. Они полностью равнозначны.

Электронную выписку из ЕГРИП с усиленной квалифицированной электронной подписью можно получить быстро и бесплатно через интернет. Бумажную выписку выдает налоговая инспекция. Это документ с голубой печатью и подписью должностного лица налоговой службы.

Когда нужна

Сведения из ЕГРИП нужны, если необходимо узнать информацию о конкретном предпринимателе: например, дату регистрации или виды деятельности.

Какие данные содержит

Из ЕГРИП о предпринимателе можно узнать такую информацию:

1. Фамилия, имя, отчество.
2. Дата и место рождения.
3. Гражданство.
4. Адрес электронной почты, если он был указан при регистрации.
5. Дата госрегистрации в качестве ИП.
6. Дата и способ прекращения статуса ИП.
7. Сведения о лицензиях.
8. ИНН и дата постановки на учет в налоговой.
9. Коды по ОКВЭД.
10. Номер и дата регистрации предпринимателя как страхователя в ПФР и ФСС.

Чтобы узнать место жительства предпринимателя, нужно написать запрос в налоговую инспекцию. В выписке из ЕГРИП этих сведений не будет. По запросу индивидуального предпринимателя налоговая обязана предоставить ему справку обо всех лицах, кто запрашивал информацию о его месте жительства.

п. 5 ст. 6 ФЗ о госрегистрации юрлиц и ИП

Стоимость получения

Данные ЕГРИП в электронном виде через интернет можно получить бесплатно.

Как получить электронную выписку из ЕГРИП

Электронную выписку можно получить через сайт налоговой или сервис СБИС.

На сайте ФНС России есть электронный сервис «Предоставление сведений из ЕГРЮЛ/ЕГРИП о конкретном юридическом лице / индивидуальном предпринимателе в форме электронного документа».

В нем необходимо указать ИНН, ОГРНИП или ФИО предпринимателя. Выписка формируется в формате PDF с усиленной квалифицированной электронной подписью. Она равнозначна выписке на бумажном носителе с печатью и подписью должностного лица.

Письмо ФНС России от 11.08.2015 № ГД-4-14/14094@

Через СБИС. Любая организация с лицензией «Все о компаниях и владельцах» может посмотреть и сохранить данные ЕГРИП по своей компании или контрагенту.

Для этого в разделе «Компании» найдите индивидуального предпринимателя, сведения о котором хотите посмотреть. Нажмите «ЕГРИП». Это будет информационная выписка, не имеющая юридической силы.

Чтобы запросить данные с электронной подписью, в карточке организации нажмите «Отчеты» и выберите «Выписка с подписью». Для этого нужно иметь лицензию «Все о компаниях и владельцах», тариф «Расширенные сведения» или лицензию «Поиск и анализ закупок».

Как получить бумажную выписку

Чтобы получить бумажную выписку из ЕГРИП, нужно составить запрос в произвольной форме и направить его в налоговую инспекцию по почте или отнести лично.

В запросе на получение данных ЕГРИП нужно указать:

1. Наименование налоговой инспекции, в которую направляется запрос.
2. Сведения о предпринимателе — фамилия, имя, отчество, ОГРНИП и ИНН.
3. Сведения о заявителе — полное или сокращенное наименование юрлица либо ФИО гражданина, номер контактного телефона, почтовый адрес или электронную почту.
4. Удобный способ получения сведений.
5. Количество необходимых экземпляров.

Административный регламент

Как получить расширенную выписку

Расширенная выписка содержит больше информации, чем обычная. Например, в расширенном документе сразу указан адрес регистрации предпринимателя.

Получить расширенную выписку из ЕГРИП можно только на самого себя. Запрос на получение аналогичен подаче заявки на получение обычной выписки, только нужно указать, что требуются расширенные сведения.

Сроки действия

Формально выписка из ЕГРИП действительна только в день выдачи, потому что уже на следующий день в реестр могут быть внесены новые сведения.

Но каждый день получать новые выписки сложно, поэтому закон устанавливает сроки действия в зависимости от конкретной ситуации. Для большинства случаев документ действителен в течение 1 месяца с даты предоставления, но сроки лучше уточнить в организации, куда представляется выписка.

Услугами ФНС России можно воспользоваться на Портале госуслуг

Услугами ФНС России можно воспользоваться на Портале госуслуг

Государственными услугами, которые предоставляет ФНС России, можно воспользоваться на Портале государственных услуг www.gosuslugi.ru.

Через Портал госуслуг пользователи могут зайти в личный кабинет налогоплательщика, проверить задолженность по налогам, узнать свой ИНН, подать налоговую декларацию 3-НДФЛ, получить сведения из ЕГРЮЛ, зарегистрироваться как индивидуальный предприниматель или юридическое лицо и т.д.

Проверить налоговую задолженность

Налоговая инспекция напоминает, что просрочка налоговых платежей может повлечь арест имущества, счетов в банке, наложение запрета на выезд за границу.

Самый простой способ предотвратить неприятности – следить за отсутствием задолженности перед государством. Для этого можно воспользоваться Единым порталом государственных и муниципальных услуг, где имеется возможность не только проверить, но и оплатить налоговую задолженность. Услуга доступна для всех пользователей, имеющих стандартную и подтвержденную учетные записи. При этом на портале оплата доступна в «Личном кабинете» в разделе «Поиск счетов», а на бета-версии портала — в разделе «Налоговая задолженность».

Проверка актуальности данных о начисленных и уплаченных налогах доступна и в сервисе ФНС России «Личный кабинет налогоплательщика для физических лиц», войти в который можно с помощью учетной записи госуслуг. Для этого достаточно просто на сайте www.nalog.ru ввести логин и пароль портала госуслуг.

В «Личном кабинете налогоплательщика для физических лиц» можно увидеть не только налоговые начисления, но и заполнить и подать налоговую декларацию через интернет, проверить информацию о своих объектах налогообложения и отследить, одобрен ли налоговый вычет.

Следует отметить, что если код подтверждения для портала госуслуг получен по почте, войти в личный кабинет с его помощью на сайте ФНС России нельзя, поскольку личность пользователя, получающего доступ к конфиденциальной информации, должна быть подтверждена им лично.

Узнать свой идентификационный номер налогоплательщика (ИНН)

Узнать информацию о своем ИНН можно с помощью сервиса ФНС России «Узнай ИНН», размещенного на сайте www.nalog.ru. Налогоплательщику достаточно заполнить в интерактивном окне сервиса соответствующую форму запроса, и на экран выводится информация об ИНН физического лица из федеральной базы данных ЕГРН.

В случае получения информации об отсутствии сведений об ИНН в федеральной базе данных ЕГРН и необходимости его получения гражданин может обратиться в налоговый орган по месту жительства с заявлением о постановке на учет.

Налоговая инспекция напоминает налогоплательщикам о возможности получения в режиме онлайн информации об ИНН физического лица также c помощью Единого портала государственных и муниципальных услуг Российской Федерации (ЕПГУ).

Для того, чтобы отправить запрос на получение информации в отношении ИНН, необходимо зайти в «Личный кабинет пользователя ЕПГУ» и выбрать услугу «Узнай свой ИНН», после чего заполнить форму, указав личные данные (ФИО, дату рождения, место рождения) и данные документа, удостоверяющего личность (серию, номер и дату его выдачи). Через несколько секунд поиска на экране выводится ответ с указанием ИНН пользователя.

Получить статус индивидуального предпринимателя

Стать индивидуальным предпринимателем можно посредством Единого портала государственных и муниципальных услуг — для помощи начинающим бизнесменам на сайте создана специальная страница.

В разделе собрана необходимая для индивидуальных предпринимателей информация: по размещенным в нем ссылкам можно узнать, как стать индивидуальным предпринимателем, каков размер госпошлины, как зарегистрироваться в Фонде социального страхования и Пенсионном фонде России, особенности патентной и упрощенной систем налогообложения. Там же дается краткая инструкция о регистрации на Портале госуслуг, приведены ссылки на популярные вопросы.

Учетная запись индивидуального предпринимателя создается только из подтвержденной учетной записи физического лица. Это значит, что для регистрации индивидуального предпринимателя предварительно необходимо пройти процедуру подтверждения учетной записи физического лица. Только после этого пользователь получает доступ ко всем государственным электронным услугам.

Для создания учетной записи индивидуального предпринимателя необходимо выполнить следующие шаги:

 — заполнить данные об индивидуальном предпринимателе;

— дождаться завершения автоматической проверки данных.

Данные об индивидуальном предпринимателе с указанными ИНН и ОГРНИП будут проверены по Единому государственному реестру налогоплательщиков (ЕГРН) и Единому государственному реестру индивидуальных предпринимателей (ЕГРИП).

С полным перечнем услуг Федеральной налоговой службы, представленных на ЕПГУ, можно ознакомиться в разделе «Налоги и финансы».      

ИФНС России по г. Истре М.О.  

Поиск освобожденных от налогов организаций

Как правило, физическое лицо, которое перечисляет вычеты, может вычитать взносы в большинство благотворительных организаций в размере до 50% (60% для денежных взносов)% от его или ее скорректированного валового дохода, рассчитанного без учета переноса чистых операционных убытков. Как правило, физические лица могут вычитать благотворительные взносы в другие организации в размере до 30% от их скорректированного валового дохода (рассчитанного без учета переноса чистых операционных убытков). Эти ограничения (и статус организации) обозначены следующим образом:

Взносы должны фактически выплачиваться наличными или иным имуществом до окончания налогового года физического лица, чтобы они могли вычитаться за этот налоговый год, независимо от того, использует ли физическое лицо денежный метод или метод начисления.

Если физическое лицо жертвует собственность, отличную от наличных денег, квалифицированной организации, это лицо, как правило, может вычесть справедливую рыночную стоимость собственности. Однако, если недвижимость подорожала, возможно, придется внести некоторые коррективы.

Правила, касающиеся определения справедливой рыночной стоимости, обсуждаются в Публикации 561 «Определение стоимости пожертвованного имущества». Более подробное обсуждение правил, касающихся удержания подоходного налога с благотворительных взносов физических лиц, см. В Публикации 526 «Благотворительные взносы».

Rac1 способствует максимальной активации STAT1 и STAT3 в астроцитах крыс, стимулированных IFN-γ

Abstract

Rac1 GTPase участвует в качестве посредника передачи сигналов в различных клеточных событиях. В этом исследовании мы показываем, что Rac1 вносит вклад в индуцированные IFN-γ воспалительные реакции в астроцитах крыс. Мы обнаружили, что IFN-γ быстро стимулировал активацию Rac1 в клетках астроглиомы C6, исследуя способность связывания GST-PAK-PBD. Мы также обнаружили, что дефицит Rac1 приводит к ослаблению IFN-γ-чувствительных транскрипционных ответов.По сравнению с уровнями в контрольных клетках, IFN-γ-индуцированная активность промотора IFN-γ-активированной последовательности была заметно снижена как в клетках астроглиомы C6, так и в первичных астроцитах, экспрессирующих RacN17, хорошо охарактеризованный Rac1-отрицательный мутант. Экспрессия нескольких IFN-γ-чувствительных генов, таких как MCP-1 и ICAM-1, также была снижена в клетках, экспрессирующих RacN17. В соответствии с этими наблюдениями, IFN-γ-индуцированное фосфорилирование STAT1 и STAT3 было ниже в клетках C6, экспрессирующих RacN17 (обозначаемых как C6-RacN17), чем в контрольных клетках.Однако не было различий в уровне экспрессии субъединицы IFN-γRα и индуцированного IFN-γ фосфорилирования JAK1 между контрольными клетками C6 и клетками C6-RacN17. Интересно, что Rac1, по-видимому, связан с IFN-γRα и усиливает взаимодействие IFN-γR с STAT1 или STAT3 в ответ на IFN-γ. Взятые вместе, мы предполагаем, что Rac1 может служить вспомогательным медиатором передачи сигналов IFN-γ, по крайней мере, на уровне активации STAT, тем самым способствуя максимальной активации IFN-γ-чувствительной передачи сигналов воспаления в астроцитах крыс.

Воспаление головного мозга тесно связано с патогенезом различных нейродегенеративных заболеваний. По сравнению с воспалением в периферических тканях, воспаление в головном мозге, по-видимому, имеет разные пути и временные рамки. Основными иммунными клетками, которые реагируют на воспалительные стимулы в головном мозге, являются астроциты и микроглия. Воспалительные реакции в этих клетках координируются последующей выработкой цитокинов, хемокинов и активных форм кислорода (1, 2, 3).Эти молекулы действуют синергетическим и / или антагонистическим образом, что в конечном итоге приводит к нейродегенерации через воспалительный каскад. Таким образом, важно понимать молекулярные механизмы, управляющие иммунными реакциями в головном мозге.

IFN-γ представляет собой воспалительный цитокин, который проявляет противовирусные, противомикробные, противоопухолевые и иммуномодулирующие свойства (обзоры см. В ссылках 4, 5). В головном мозге IFN-γ может вызывать реактивный астроглиоз. Под воздействием IFN-γ астроциты пролиферируют и увеличивают экспрессию различных молекул, связанных с воспалением, включая ICAM-1 и TNF-α, а также глиального фибриллярного кислого белка (6, 7, 8).Как правило, связывание IFN-γ с его рецепторами вызывает сборку активного рецепторного комплекса и последующее трансфосфорилирование рецептор-ассоциированных JAK1 и JAK2 (4, 5). Фосфорилированные JAK1 и JAK2 приводят к фосфорилированию остатков тирозина в цитоплазматическом хвосте рецептора, которые обеспечивают сайты стыковки для STAT. После рекрутирования в рецепторный комплекс STAT фосфорилируется как по Tyr ^{, 701,} , так и по Ser ⁷²⁷ . Фосфорилированный STAT высвобождается из рецепторного комплекса и образует димеры.Эти димеры перемещаются в ядро, где они непосредственно связываются с IFN-γ-активированными последовательностями (GAS), ⁴ , тем самым регулируя транскрипцию IFN-γ-чувствительных генов (9, 10).

Появляется все больше сообщений о том, что передача сигналов JAK / STAT точно регулируется перекрестными помехами и конвергенцией между различными путями передачи сигналов. Было показано, что рецепторы, связанные с G-белком (GPCR), тесно связаны с передачей сигналов JAK / STAT (11, 12, 13). Например, агонист GPCR ангиотензин II может стимулировать фосфорилирование тирозина JAK и STAT рецептором AT1 ангиотензина II (11).Недавно было сообщено, что небольшие GTPase Rho и Rac необходимы для GPCR-индуцированной активации JAK и STAT (14). В соответствии с этими результатами, несколько отчетов показали, что Rac1 напрямую взаимодействует с STAT3 и стимулирует фосфорилирование STAT3 в ответ на факторы роста (15, 16).

В иммунных ответах возрастает функциональная важность Rac (17, 18, 19). Исследования на мышах и пациентах с дефицитом Rac показали, что Rac тесно связан с синдромом иммунодефицита и нарушениями защиты хозяина от патогенной инфекции (20, 21).Основываясь на этих доказательствах, мы поставили под вопрос, может ли Rac1 способствовать активации путей JAK / STAT, запускаемых IFN-γ в астроцитах крыс. В этом исследовании мы показываем, что IFN-γ быстро активирует Rac1, и что дефицит Rac1 приводит к ослаблению активации STAT и последующим воспалительным ответам IFN-γ. Результаты этого исследования предполагают, что Rac1 может участвовать в качестве вспомогательного компонента в индуцированной IFN-γ воспалительной передаче сигналов в астроцитах головного мозга крыс.

Материалы и методы

Реактивы

Крысиный IFN-γ и Ab против фосфорилированного JAK1 были получены от Calbiochem (Сан-Диего, Калифорния).Антибиотики MEM, Lipofectamine Plus и G418 были от Invitrogen Life Technologies (Карлсбад, Калифорния. DMEM и FBS были от HyClone (Логан, Юта). Abs против STAT1, Tyr ⁷⁰¹ -фосфорилированный STAT1 и STAT3 был от Cell Signaling Technology ( Беверли, Массачусетс). Ат против JAK2, фосфорилированный JAK2 и rac 1 были получены от Upstate Biotechnology (Лейк-Плэсид, штат Нью-Йорк). Ат против IFN-γRα были приобретены в Santa Cruz Biotechnology (Санта-Крус, Калифорния). Вторичный конъюгированный с пероксидазой Abs были от Vector Laboratories (Бурлингейм, Калифорния).

Культура клеток

клеток астроглиомы крысы С6 получали из Американской коллекции типовых культур (Манассас, Вирджиния; ATCC CCL-107). Клетки выращивали в среде DMEM с добавлением 10% (об. / Об.) FBS. Первичные астроциты культивировали из коры головного мозга 1-3-дневных крыс Sprague Dawley, как описано ранее (22). Вкратце, кортикальный слой растирали на отдельные клетки в MEM, содержащем 10% FBS, и помещали в 75 см ² Т-колб (0.5 полушарий / колбу) в течение 2–3 недель. Для получения чистых астроцитов микроглию отделяли от колб путем легкого встряхивания, а оставшиеся в колбе клетки собирали с 0,1% трипсином. Астроциты высевали в чашки и культивировали в MEM с добавлением 10% FBS.

Анализы связывания GST-PAK-PBD

Активацию Rac1 определяли, как сообщалось ранее (23). Вкратце, конструкция pGEX, кодирующая GTPase-связывающий домен PAK1, экспрессировалась в Escherichia coli в виде слитого белка GST (GST-PBD).Клетки C6 инкубировали в бессывороточной среде в течение 24 ч, а затем обрабатывали 10 ед. / Мл IFN-γ. Клетки лизировали и инкубировали с 3 мкг GST-PBD. Для обнаружения GTP-связанного Rac1 белки разделяли с помощью SDS-PAGE и проводили вестерн-блоттинг с использованием Abs против Rac1.

Плазмиды

Конститутивно активный мутант и pEXV-RacN17, доминантно-отрицательный мутант Rac1, были подарками доктора А. Холла (Университетский колледж Лондона, Лондон, Великобритания). Репортерная конструкция люциферазы 8-GAS была подарком Dr.М.-х. Шонг (Национальный университет Чунгнам, Тэджон, Корея).

Получение клеток, стабильно экспрессирующих RacN17

Для создания линий клональных клеток C6, стабильно экспрессирующих RacN17, плазмидные конструкции pEXV-RacN17 и pcDNA-Neo ^R котрансфицировали в клетки C6 с помощью Lipofectamine Plus. Трансфицированные клетки отбирали и поддерживали в присутствии 400 мкг / мл антибиотика G418 в среде DMEM с добавлением 10% FBS. Отдельные устойчивые к G418 колонии выделяли через 2–3 недели и увеличивали до клеточных линий.Экспрессию белка RacN17 в клонах подтверждали Вестерн-блоттингом с использованием анти-c-Myc эпитопа Ab (24).

Люциферазный анализ

Временные трансфекции выполняли в двух экземплярах на 35-миллиметровых чашках с использованием реагентов Lipofectamine Plus в соответствии с инструкциями производителя (Invitrogen Life Technologies). Для нормализации вариаций числа клеток и эффективности трансфекции все клоны котрансфицировали pCMV-β-галактозидазой в течение 24 часов. Анализ люциферазы выполняли в соответствии с инструкциями производителя (Promega, Madison, WI).Люциферазную активность измеряли с использованием 20 мкл клеточного экстракта в 100 мкл буфера для анализа. Интенсивность света измеряли в течение 30 с на люминометре (Berthold Lumat LB9501; Berthold Technologies, Oak Ridge, TN). Активность люциферазы нормализовали путем измерения активности β-галактозидазы (в OD ₄₂₀ ).

Вестерн-блоттинг

Клетки дважды промывали холодным PBS, а затем лизировали ледяным модифицированным буфером RIPA (50 мМ трис-HCl (pH 7.4), 1% Nonidet P-40, 0,25% дезоксихолат натрия, 150 мМ NaCl, 1 мМ Na ₃ VO ₄ и 1 мМ NaF), содержащие ингибиторы протеаз (2 мМ PMSF, 100 мкг / мл лейпептина, 10 мкг / мл пепстатина, 1 мкг / мл апротинина и 2 мМ ЭДТА). Лизат центрифугировали в течение 20 минут при 13000 × g при 4 ° C и собирали супернатант. Белки разделяли с помощью SDS-PAGE и переносили на нитроцеллюлозную мембрану. Мембрану инкубировали с первичными Ат, вторичными Ат, конъюгированными с пероксидазой, а затем визуализировали с помощью системы ECL.

Иммунопреципитация

Клетки, выращенные на чашках диаметром 100 мм, дважды промывали PBS перед лизисом. Модифицированный буфер RIPA, содержащий ингибиторы протеаз, добавляли для лизиса клеток. Клеточный лизат собирали и центрифугировали при 13000 × g в течение 20 минут. Супернатанты инкубировали в течение ночи с первичными антителами при качании, и иммунные комплексы собирали на шариках с протеином G в течение 2 часов. Иммунопреципитаты трижды промывали модифицированным буфером RIPA и собирали.Затем полученные осадки исследовали с помощью SDS-PAGE и иммуноблот-анализа.

ОТ-ПЦР

Тотальную РНК экстрагировали с использованием РНКазола B (Tel-Test, Friendswood, TX), а кДНК получали с использованием обратной транскриптазы, происходящей из вируса птичьего миелобластоза (TaKaRa, Shiga, Japan), в соответствии с инструкциями производителя. ПЦР проводили с 30 циклами последовательных реакций: 94 ° C в течение 30 с, 55 ° C в течение 30 с и 72 ° C в течение 90 с. Олигонуклеотидные праймеры приобретены у Bioneer (Сеул, Корея).Последовательности праймеров ПЦР были следующими: обратный, 5′-AAGGCCGCAGAGAGCAAAAGAAGC-3 ‘, и прямой, 5′-CTGGAGAGCACAAACAGCAGAG-3′, для ICAM-1; обратный 5’-ATGCAGGTCTCTGTCACGCT-3 ‘и прямой 5′-CTAGTTCTCTGTCATACTGG-3′ для MCP-1; обратный, 5’-AGATCCACAACGGATACATT-3 ‘, и прямой, 5′-TCCCTCAAGATTGTCAGCAA-3’, для GAPDH.

Проточно-цитометрический анализ

Клетки инкубировали в бессывороточной среде в течение 24 часов, а затем обрабатывали 10 ед / мл IFN-γ в течение указанного времени.Клетки дважды промывали PBS, содержащим 1% FBS, собирали и затем окрашивали FITC-конъюгированными mAb против CD54 (ICAM-1) крысы (BD Pharmingen, San Diego, CA) в течение 30 мин при 4 ° C. После промывания клетки анализировали с помощью FACSVantage (BD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния), и данные обрабатывали с помощью программы CellQuest (BD Biosciences) и WinMDI.

Результаты

IFN-γ стимулирует активацию Rac1

В попытке выяснить, опосредует ли Rac1 действие IFN-γ в астроцитах, мы исследовали, может ли IFN-γ стимулировать активацию Rac1 в клетках астроглиомы C6.Активация Rac1 определялась как его способность связываться с GTPase-связывающим доменом p21-активированной киназы (PAK-PBD) (23). Клетки C6 стимулировали 10 ед. / Мл IFN-γ, и связанный с GST-PAK-PBD активный Rac1 выявляли вестерн-блот-анализом с использованием антител против Rac1. Интересно, что связывание Rac1 с GST-PAK-PBD значительно увеличивалось в течение 5 минут после обработки IFN-γ, достигало пика через 15-30 минут, а затем постепенно снижалось (рис. 1⇓, A , и данные не показаны). Для дальнейшего изучения IFN-γ-индуцированной активации Rac1 клетки C6 обрабатывали различными концентрациями IFN-γ в течение 15 минут, а затем исследовали связывающую способность Rac1 с GST-PAK-PBD.Связывание Rac1 с GST-PAK-PBD было незначительно обнаружено в клетках, обработанных 0,1 Ед / мл IFN-γ, и отчетливо наблюдалось в клетках, обработанных 1-10 Ед / мл IFN-γ (рис. 1– B ). Эти результаты показывают, что IFN-γ быстро стимулирует активацию Rac1, предполагая возможность того, что Rac1 может вносить вклад в функцию IFN-γ в астроцитах.

IFN-γ индуцирует активацию Rac1. Клетки , C6 инкубировали в бессывороточной среде в течение 24 часов и обрабатывали 10 ед / мл IFN-γ в течение указанного времени.Количество Rac1, связанного с слитым белком GST-PAK1-PBD, анализировали с помощью вестерн-блоттинга, как описано в Materials and Methods . B Клетки , C6 обрабатывали IFN-γ в различных концентрациях в течение 15 мин, а затем GST-PAK-PBD-связанный активный Rac1 выявляли вестерн-блот-анализом с использованием антител против Rac1. Полоса GST была показана как контроль загрузки.

Доминантно-отрицательный Rac1 снижает IFN-γ-индуцированную активность промотора GAS в астроцитах крыс

Поскольку IFN-γ быстро активирует Rac1 в астроцитах, мы исследовали, может ли Rac1 участвовать в передаче сигналов, индуцированной IFN-γ.Для этого мы сначала исследовали влияние доминантно-отрицательного мутанта Rac1 (pEXV-RacN17) или постоянно активного мутанта (pEXV-RacV12) на активацию транскрипции GAS. Клетки C6 временно трансфицировали плазмидами-репортерами люциферазы, содержащими элементы 8-GAS и либо pEXV-RacN17, либо pEXV-RacV12, либо контрольный вектор. Через 24 часа после трансфекции клетки стимулировали 10 ед / мл IFN-γ в течение 24 часов. Затем определяли активность люциферазы и результат нормализовали по эффективности трансфекции путем сравнения активности β-галактозидазы.IFN-γ резко усиливал активность люциферазы GAS в контрольных клетках, трансфицированных одним вектором. Напротив, IFN-γ-индуцированная активность люциферазы GAS была значительно снижена в клетках, трансфицированных RacN17 (фиг. 2⇓ A ). Не было значительного различия в активности люциферазы между клетками, трансфицированными RacV12, и контрольным вектором (фиг. 2⇓ A ). Интересно, что базальный уровень активности люциферазы GAS также был снижен в клетках, трансфицированных RacN17, по сравнению с таковым в клетках, трансфицированных контрольным вектором (рис.2⇓ А ). Чтобы расширить эти исследования, клетки C6 временно трансфицировали различными концентрациями RacN17. В соответствии с приведенным выше результатом относительная активность люциферазы снижалась с увеличением концентрации RacN17 (фиг. 2⇓ B ).

Экспрессия RacN17 заметно ослабляет активность промотора GAS в астроцитах крыс. A , Конструкцию люциферазы 8-GAS котрансфицировали с помощью pEXV-RacN17, pEXV-RacV12 или одного вектора в клетки C6 в течение 24 часов.Клетки не обрабатывали или обрабатывали 10 ед. / Мл IFN-γ в течение 24 часов, а затем анализировали на люциферазную активность. B Клетки , C6 котрансфицировали конструкцией люциферазы 8-GAS и различными концентрациями pEXV-RacN17 в течение 24 часов. Затем клетки обрабатывали 10 ед. / Мл IFN-γ в течение 24 часов и собирали для анализа люциферазы. C . Люциферазную конструкцию 8-GAS котрансфицировали с помощью pEXV-RacN17 или одного вектора в первичные астроциты крысы, и клетки обрабатывали указанной концентрацией IFN-γ в течение 24 часов.Активности люциферазы, показанные в этом исследовании, были рассчитаны после измерения активности β-галактозидазы для нормализации эффективности трансфекции. Значения являются средними ± стандартное отклонение дубликатов. Приведенные данные являются репрезентативными, по крайней мере, для четырех независимых экспериментов.

Затем мы исследовали, наблюдается ли влияние RacN17 на IFN-γ-индуцированную активность ГАЗ в первичных астроцитах. Первичные астроциты крыс котрансфицировали репортерными генами люциферазы RacN17 и GAS, а затем обрабатывали различными концентрациями IFN-γ в течение 24 часов.В первичных астроцитах, а также в клетках глиомы C6 экспрессия RacN17 значительно снижает IFN-γ-индуцированную активность люциферазы GAS (рис. 2– C ). Эти находки подтверждают гипотезу, что Rac1 играет роль в передаче сигналов IFN-γ в астроцитах крыс.

Экспрессия IFN-γ-чувствительных генов ослаблена в клетках C6, экспрессирующих RacN17

Для дальнейшей оценки вклада Rac1 в индуцированные IFN-γ клеточные ответы мы установили клеточные линии C6-RacN17, доминантно-отрицательные мутантные клетки, стабильно экспрессирующие RacN17 (обозначаемые как C6-RacN17) (24).После исследования уровня экспрессии RacN17 с использованием анти-c-Myc эпитопа Ab (фиг. 3⇓ A ) мы сначала исследовали, снижается ли также IFN-γ-индуцированная активность люциферазы GAS в стабильных клеточных линиях C6-RacN17. Клетки инкубировали с 10 ед. / Мл IFN-γ в течение указанного времени, после чего измеряли активность люциферазы. Мы обнаружили, что IFN-γ-индуцированная активность люциферазы GAS была значительно снижена в клетках C6-RacN17 по сравнению с таковыми в контрольных клетках C6 (фиг. 3⇓ A ). Эти результаты согласуются с данными для клеток C6, временно трансфицированных RacN17.

IFN-γ-усиленная активность люциферазы GAS и экспрессия гена ослаблены в клетках, экспрессирующих RacN17. A . Разница в активности люциферазы GAS между контрольными клетками C6 ( a ) и клетками C6-RacN17 ( b ) увеличивалась в зависимости от времени. Уровень экспрессии RacN17 определяли вестерн-блоттингом с использованием анти-c-Myc Ab в стабильном клоне C6-RacN17. Клетки C6 и C6-RacN17 обрабатывали 10 ед. / Мл IFN-γ в течение указанного времени, а затем анализировали на люциферазную активность. B . Транскрипция MCP-1 и ICAM-1 была низкой в ​​клетках C6-RacN17. Клетки обрабатывали 10 ед / мл IFN-γ в течение указанного времени, а затем проводили анализ RT-PCR для обнаружения экспрессии мРНК MCP-1 и ICAM-1. Экспрессия GAPDH была обнаружена как внутренний контроль. C . Экспрессия ICAM-1 на клеточной поверхности была низкой в ​​клетках C6-RacN17 по сравнению с таковой в контрольных клетках C6. Клетки обрабатывали 10 ед / мл IFN-γ в течение указанного времени, а затем проводили FACS-анализ с FITC-конъюгированными mAb против CD54 (ICAM-1) крысы.Приведенные данные являются репрезентативными для более чем трех независимых экспериментов.

Снижение активности промотора GAS, усиленного IFN-γ, в Rac1-дефицитных клетках привело нас к исследованию влияния дефицита Rac1 на уровень транскрипта IFN-γ-чувствительных генов. Мы исследовали уровни мРНК MCP-1 и ICAM-1, которые, как ранее сообщалось, содержат функциональные элементы GAS (25, 26). Клетки стимулировали 10 ед. / Мл IFN-γ в течение указанного времени, и общую РНК экстрагировали для анализа RT-PCR.Как показано на фиг. 3⇑ B , IFN-γ-индуцированные уровни транскриптов MCP-1 и ICAM-1 были относительно низкими в клетках C6-RacN17 по сравнению с контрольными клетками C6. Мы наблюдали аналогичные результаты в первичных астроцитах, временно трансфицированных RacN17 (данные не показаны).

Кроме того, мы исследовали экспрессию ICAM-1 на клеточной поверхности с помощью проточного цитометрического анализа с использованием FITC-конъюгированных mAb против CD54 (ICAM-1) крысы. В соответствии с приведенными выше результатами, базальный уровень экспрессии ICAM-1 был значительно ниже в клетках C6-RacN17 по сравнению с таковым в контрольных клетках C6, и индуцированное IFN-γ усиление экспрессии ICAM-1 также было слабым в клетках C6-RacN17. (Рис.3⇑ C ). Эти результаты дополнительно подтверждают представление о том, что Rac1 способствует индуцированной IFN-γ транскрипционной активации в астроцитах.

RacN17 не влияет на уровень экспрессии субъединицы IFN-γRα

Учитывая, что экспрессия доминантно-отрицательного Rac1 значительно ослабляет экспрессию GAS-зависимого гена, мы поставили под сомнение, вызывает ли RacN17 подавление IFN-γR. Используя Ab против субъединицы IFN-γRα, мы проверили эту возможность. Вестерн-блоттинг показал, что уровень экспрессии IFN-γRα не отличался в контроле C6 и клетках C6-RacN17 (рис.4⇓ A ). В клетках, временно экспрессирующих RacN17, мы не обнаружили снижения экспрессии IFN-γRα по сравнению с клетками, экспрессирующими только вектор (фиг. 4⇓ B ). Мы также обнаружили, что IFN-γ не изменяет уровень экспрессии IFN-γRα в клетках C6 и первичных астроцитах крыс (фиг. 4⇓, A и B , и данные не показаны). Эти результаты показывают, что ингибирующее действие доминантно-отрицательного Rac1 на IFN-γ-индуцированную регуляцию транскрипции не связано с подавлением экспрессии IFN-γR.

Уровень экспрессии IFN-γR не изменяется при экспрессии RacN17. A , Клетки не обрабатывали или обрабатывали 10 ед. / Мл IFN-γ в течение 12 часов, а затем анализировали для вестерн-блоттинга с использованием Ab против IFN-γRα. B . После временной трансфекции клеток C6 pEXV-RacN17 или одним вектором в течение 24 часов уровень экспрессии IFN-γRα оценивали с помощью Вестерн-блоттинга. Приведенные данные являются репрезентативными для четырех независимых экспериментов.

Rac1 играет роль в стимулированном IFN-γ фосфорилировании STAT1 и STAT3, но не JAK1

Активация STAT1 и STAT3 является предпосылкой для активации промотора GAS, а фосфорилирование тирозина и серина необходимо для максимальной активности STAT (5, 14). Учитывая критическую роль STAT1 и STAT3 в передаче сигналов IFN-γ, мы исследовали активацию этих молекул в клетках, экспрессирующих RacN17. Клетки стимулировали IFN-γ в течение указанного времени, и уровни фосфорилированных STAT1 и STAT3 определяли с помощью вестерн-блоттинга с использованием Ат против фосфорилированных тирозином STAT1 и STAT3 (рис.5⇓ A ). В контрольных клетках C6 сильное фосфорилирование STAT1 и STAT3 наблюдалось в течение 2,5 минут после добавления IFN-γ, и уровни поддерживались до 1 часа. Однако стимулированное IFN-γ фосфорилирование STAT1 и STAT3 в клетках C6-RacN17 было значительно слабым (рис. 5⇓ A ). Уровень экспрессии общего STAT1 и STAT3 не отличался в контрольных клетках C6 и клетках C6-RacN17. Взятые вместе, эти результаты показали, что активация STAT1 и STAT3 различалась между контрольными клетками C6 и клетками C6-RacN17, что согласуется с различиями в активности GAS и экспрессии мРНК MCP-1 и ICAM-1 между контролем C6 и C6-RacN17. клетки.

Экспрессия RacN17 ослабляет индуцированное IFN-γ фосфорилирование STAT1 и STAT3, но не JAK1. A , Клетки голодали по сыворотке в течение 24 часов, а затем стимулировали 10 ед / мл IFN-γ в течение указанного времени. Лизаты клеток разделяли с помощью 10% SDS-PAGE и проводили вестерн-блоттинг с использованием антител, специфичных для фосфо-Tyr-STAT1 (pSTAT1) или фосфо-Tyr STAT3 (pSTAT3). Затем мембрану отделяли и последовательно анализировали с использованием Ат, специфичных для общего STAT1 или STAT3, и актина, соответственно. B , RacN17 не влияет на индуцированное IFN-γ фосфорилирование JAK1. Фосфорилирование JAK1 детектировали с помощью вестерн-блоттинга с использованием Ab, специфичных для фосфо-Tyr-JAK1 (pJAK1). С мембраны снимали и зондировали актином Ab, чтобы показать количество загруженного белка. Клетки Ca , C6 обрабатывали 10 ед. / Мл IFN-γ в течение 2,5 и 5 минут. Cb , Клетки C6 предварительно обрабатывали AG490 (5–10 мкМ) в течение 1 ч, а затем стимулировали 10 ед. / Мл IFN-γ в течение 30 мин. Количество Rac1, связанного с гибридным белком GST-PAK-PBD, анализировали вестерн-блоттингом с использованием Ab против Rac1.Полоса GST была показана как контроль загрузки. Приведенные данные являются репрезентативными для четырех независимых экспериментов.

Затем мы исследовали, влияет ли RacN17 на активацию JAK, поскольку фосфорилирование STAT1 и STAT3 зависит от активации JAK. Клетки стимулировали IFN-γ в течение указанного времени, и клеточные лизаты подвергали вестерн-блоттингу с использованием Ab против Tyr-фосфорилированного JAK1 (фиг. 5⇑ B ). Интересно, что в клетках C6-RacN17 фосфорилирование JAK1 не ослаблялось: как в контрольных клетках C6, так и в клетках C6-RacN17 фосфорилирование JAK1 обнаруживалось в пределах 2.5 минут добавления IFN-γ и выдержка до 60 минут (рис. 5⇑ B ). Эти результаты предполагают, что дефицит Rac1 приводит к блокированию передачи сигналов IFN-γ на уровне ниже JAK1. Чтобы еще больше очертить это понятие, мы подробно исследуем кинетику активации Rac1 по отношению к активации JAK. Связывание Rac1 с GST-PAK-PBD наблюдали через 2,5 мин обработки IFN-γ так же быстро, как фосфорилирование JAK1 (фиг. 5⇑ Ca ). Таким образом, мы исследовали, влияет ли IFN-γ-индуцированная активация Rac1 ингибированием активности JAK в клетках C6.В соответствии с приведенными выше данными (рис. 5⇑ B ), обработка AG490, специфического ингибитора JAK1 и JAK2, значительно уменьшала связывание Rac1 с GST-PAK-PBD в клетках C6 (рис. 5⇑ Cb. ). Эти результаты показывают, что IFN-γ может активировать Rac1 посредством активации JAK, а дефицит Rac1 не влияет на IFN-γ-индуцированную активацию JAK в астроцитах.

Rac1 связывается с IFN-γRα, STAT1 и STAT3

Приведенные выше результаты подняли вопрос о том, как Rac1 может модулировать фосфорилирование STAT1 и STAT3 в астроцитах.В попытке понять это мы исследовали, может ли Rac1 взаимодействовать с IFN-γR. Клетки C6 обрабатывали 10 ед. / Мл IFN-γ, и клеточные лизаты подвергали иммунопреципитации IFN-γRα. Затем был проведен вестерн-блоттинг с использованием антител против Rac1, JAK1, STAT1 и IFN-γRα соответственно. Интересно, что анализ коиммунопреципитации показал, что IFN-γRα взаимодействует с Rac1, а также с JAK1 и STAT1 (фиг. 6⇓ A ). Кроме того, ассоциация IFN-γRα с Rac1 была обнаружена в отсутствие IFN-γ, тогда как ассоциация IFN-γRα с JAK1 или STAT1 была обнаружена в присутствии IFN-γ (рис.6⇓ А ). Чтобы подтвердить это предположение, мы провели анализ иммунопреципитации с Rac1 Ab. Соответственно, ассоциация Rac1 с IFN-γR была также обнаружена в иммунопреципитированном комплексе с Rac1 (фиг. 6⇓ B ). Однако мы не наблюдали разницы в ассоциации Rac1 с IFN-γRα в клетках C6-RacN17 по сравнению с таковой в контрольных клетках C6 (фиг. 6⇓ B ). Эти результаты предполагают, что Rac1 может взаимодействовать с IFN-γRα, но их взаимодействие не регулируется активацией Rac1, индуцированной IFN-γ.

Rac1 взаимодействует с IFN-γRα, JAK и STAT. Клетки , C6 инкубировали в бессывороточной среде в течение 24 часов и обрабатывали 10 ед / мл IFN-γ в течение указанного времени. Лизаты подвергали иммунопреципитации с помощью Ab против субъединицы IFN-γRα и подвергали Вестерн-блоттингу. Мембрану серийно подвергали блоттингу с использованием Abs против JAK1, STAT1 и Rac1. B Клетки , C6 и C6-RacN17 инкубировали в бессывороточной среде в течение 24 часов и обрабатывали IFN-γ в течение указанного времени.Лизаты подвергали иммунопреципитации с помощью Ab против Rac1 и подвергали Вестерн-блоттингу. Мембрану серийно подвергали блоттингу с использованием Abs против IFN-γRα и Rac1. Клетки C , C6 и C6-RacN17 инкубировали в бессывороточной среде в течение 24 ч и обрабатывали 10 ед / мл IFN-γ в течение указанного времени. Лизаты подвергали иммунопреципитации с помощью Ab против Rac1 и подвергали вестерн-блоттингу. Мембрану серийно подвергали блоттингу с использованием Abs против STAT1, STAT3 и Rac1. Показанные данные являются репрезентативными для трех независимых экспериментов.

Учитывая сообщение о том, что Rac1 связывается и регулирует активность STAT3 в ответ на эпидермальный фактор роста (15), мы исследовали, может ли Rac1 взаимодействовать со STAT1 и STAT3 в клетках C6, обработанных IFN-γ. Клетки C6 стимулировали IFN-γ и иммунопреципитировали с помощью Rac1 Ab. Затем был проведен вестерн-блоттинг с использованием STAT1 или STAT3. Как показано на фиг. 6, C , как STAT1, так и STAT3 были коиммунопреципитированы с Rac1 в клетках C6 (фиг. 6: C , a и b ).Хотя STAT1 и STAT3 были слабо обнаружены в отсутствие IFN-γ, они были четко обнаружены в присутствии IFN-γ (фиг. 6: C , a и b ). Таким образом, мы исследовали, может ли дефицит Rac1 влиять на стимулированную IFN-γ ассоциацию Rac1 с STAT1 или STAT3. Интересно, что хотя мы переэкспонировали пленку, мы не наблюдали усиленной ассоциации Rac1 ни с STAT1, ни с STAT3 в присутствии IFN-γ (рис. 6: C , a и c ).Эти результаты предполагают, что Rac1 может связываться с STAT1 или STAT3 в ответ на IFN-γ, и их ассоциация может способствовать максимальной активации STAT1 и STAT3 в клетках C6.

Обсуждение

Rac GTPase, как было показано, играет ключевую регуляторную роль в различных клеточных событиях, таких как организация цитоскелета, рост клеток, развитие, апоптоз, регуляция транскрипции и продукция супероксида (обзоры см. В ссылках 27, 28, 29). Недавно появилось несколько сообщений о том, что Rac GTPase важна для иммунных ответов (17, 18, 19, 20, 21).Однако мало что известно о специфической функции Rac в иммунных ответах, индуцированных IFN-γ. В этом исследовании мы показываем, что Rac1 действует как медиатор в индуцированной IFN-γ активации воспалительного сигнального пути STAT, тем самым способствуя полной активации индуцированных IFN-γ сигнальных ответов в астроцитах крыс.

Участие Rac1 в передаче сигналов IFN-γ было получено путем измерения активности Rac1. Rac1 — это бинарный переключатель, который переключается между активным GTP-связанным и неактивным GDP-связанным состояниями для регулирования различных клеточных процессов.Сообщалось, что Rac1 в его активных формах, связанных с GTP, связывается с PAK посредством взаимодействия с PBD (23). В клетках C6 связывание Rac1 с GST-PAK-PBD было значительно усилено обработкой IFN-γ (рис. 1). Факторы обмена гуаниновых нуклеотидов, такие как Vav и son of sevenless (Sos) -1, активируют Rac1, обменивая GDP на GTP (30, 31). В нескольких исследованиях сообщалось о возможном участии Vav в передаче сигналов IFN-γ и -α. В мышиных макрофагах RAW 264.7 IFN-γ запускает быстрое фосфорилирование тирозина Vav (32).В мегакариоцитарных клетках Vav физически связан как с α, так и с β цепями IFN-γR (33). Кроме того, рецепторные тирозинкиназы активируют Sos-1 посредством взаимодействия с адаптерной молекулой Grb2 (34), хотя четко не определено, активируется ли Sos-1 IFN-γ. В наших экспериментах активация Rac1 отменялась в присутствии ингибитора JAK, AG490, тогда как Rac1 не влиял на индуцированное IFN-γ фосфорилирование JAK1 (фиг. 5⇑, B и C ). Эти результаты предполагают, что IFN-γ активирует Rac1 JAK-зависимым образом.В связи с этим возможно, что IFN-γ активирует JAK, а затем фактор обмена гуаниновых нуклеотидов, что приводит к активации Rac1 в астроцитах. Подробный механизм будет уточнен в будущих исследованиях.

Наши результаты подняли вопрос о том, что Rac1 играет роль в воспалительной передаче сигналов, индуцированной IFN-γ. Чтобы изучить роль Rac1 в передаче сигналов IFN-γ, мы использовали хорошо охарактеризованный мутант Rac1, RacN17, у которого отсутствует активность GTPase. Усиленная IFN-γ активность промотора GAS была значительно ослаблена в клетках астроглиомы С6, экспрессирующих RacN17, и аналогичные эффекты наблюдались в первичных астроцитах крыс (фиг.2⇑ и 3⇑). Однако временная трансфекция конститутивно активным мутантом RacV12 не вызывала значительного изменения активности GAS. Эти находки предполагают, что Rac1 может участвовать в качестве медиатора в передаче сигналов IFN-γ и что уровень эндогенной экспрессии Rac1 может быть достаточным для выполнения этой роли в астроцитах крыс. Вклад Rac1 в IFN-γ-индуцируемую регуляцию транскрипции был дополнительно продемонстрирован путем измерения транскрипции MCP-1 и ICAM-1, которые имеют STAT-связывающие мотивы в своих промоторных областях (25, 26).Базальный уровень этих транскриптов в клетках, экспрессирующих RacN17, был значительно ниже, чем в контрольных клетках. Более того, индукция этих транскриптов IFN-γ в клетках, экспрессирующих RacN17, была заметно слабее по сравнению с контрольными клетками (фиг. 3⇑ B ). В соответствии с этими результатами, экспрессия ICAM на клеточной поверхности также, по-видимому, была низкой в ​​клетках, экспрессирующих RacN17 (фиг. 3⇑ C ). Кроме того, результаты настоящего исследования показали, что дефицит Rac1 ослабляет стимулированное IFN-γ фосфорилирование тирозина не только STAT1, но и STAT3.Однако он не снижал уровень экспрессии IFN-γRα и уровень фосфорилирования JAK1 (фиг. 4 и 5). Фосфорилирование JAK1 в C6-RacN17 было довольно повышенным и устойчивым по сравнению с таковым в контрольных клетках C6 (фиг. 5⇑ B ). Одним из возможных объяснений этого является уменьшение количества IFN-γ-индуцированных ингибирующих молекул для JAK1, таких как супрессоры передачи сигналов цитокинов (SOCS), в клетках C6-RacN17. Чтобы предотвратить пагубные последствия, интенсивность и продолжительность активации JAK-STAT строго регулируются.Обычно SOCS присутствуют в клетках на очень низких уровнях, но быстро транскрибируются после воздействия на клетки стимула. Сообщалось, что SOCS связывается с JAK и ингибирует их тирозинкиназную активность (35, 36). То есть дефицит Rac1 может снижать фосфорилирование STAT, а затем уменьшать индукцию IFN-γ-индуцированных ингибирующих молекул для JAK1. Следовательно, сниженное действие ингибиторов JAK1 может приводить к устойчивому фосфорилированию JAK1 в клетках C6-RacN17. Взятые вместе, эти находки убедительно показывают, что Rac1 вносит вклад в передачу сигналов IFN-γ, по крайней мере, на уровне фосфорилирования STAT.

Следующий вопрос — как Rac1 регулирует фосфорилирование STAT. Мы рассмотрели возможность того, что Rac1 может взаимодействовать с комплексом IFN-γR и увеличивать его активность. Сообщалось, что Rac1 напрямую связывается с несколькими белками, включая p67 ^phox , p21-активированную киназу 1 и STAT3, а затем стимулирует их активность путем образования активного комплекса (15, 37). Результаты этого исследования показали несколько интересных открытий о роли Rac1 в передаче сигналов IFN-γ.Сначала Rac1 коиммунопреципитировали с комплексом IFN-γR, включая IFN-γRα, STAT1 и STAT3. Во-вторых, ассоциация Rac1 с IFN-γRα была обнаружена в отсутствие IFN-γ. В-третьих, ассоциация Rac1 с IFN-γRα также была обнаружена в клетках C6-RacN17, а также в клетках C6. В-четвертых, IFN-γ значительно увеличивал ассоциацию Rac1 с STAT1 или STAT3 в клетках C6, но не в клетках C6-RacN17. Эти результаты предполагают, что Rac1 может усиливать образование активного комплекса IFN-γR, включая IFN-γRα и STAT, в ответ на IFN-γ, тем самым способствуя максимальной активации STAT1 и STAT3.Ранее Simon et al. (15) предположили, что Rac1 может напрямую связываться с STAT3 с помощью факторов роста и регулировать фосфорилирование STAT3 в клетках COS-1. Однако о взаимодействии между Rac1 и IFN-γRα пока не сообщалось. Хотя требуются интенсивные эксперименты для объяснения вопросов об ассоциации Rac1 с комплексом IFN-γR, наши результаты предполагают новый перекрестный обмен между Rac1 и IFN-γ-индуцированной воспалительной передачей сигналов в астроцитах крыс. Таким образом, настоящее исследование предполагает, что Rac1 быстро активируется IFN-γ, а затем способствует активации фосфорилирования STAT в качестве вспомогательного медиатора, тем самым приводя к максимальной активации воспалительных сигнальных ответов в астроцитах крыс.

Благодарности

Мы благодарим доктора Алана Холла (Университетский колледж Лондона, Лондон, Великобритания) за предоставление pEXV-RacN17 и pEXV-RacV12 и доктора Мин-хо Шонга (Национальный университет Чунгнам, Тэджон, Корея) за предоставление плазмиды pGL-8 GAS.

Сноски

• Расходы на публикацию этой статьи были частично покрыты за счет оплаты страницы. Таким образом, данная статья должна быть помечена как реклама в соответствии с 18 U.S.C. Раздел 1734 исключительно для указания этого факта.

• ↵1 Эта работа была поддержана междисциплинарной исследовательской программой Корейского научно-технического фонда (KOSEF 1999-2-207-004-5), KOSEF через Центр исследования болезней мозга при университете Аджу и грантом M103KV010006 03K2201 00650 от Центр исследований мозга программы исследований границ 21 века, финансируемой Министерством науки и технологий Республики Корея (Э.-Х.J.).

• №2 E.J.P. и К.-А.Дж. внес равный вклад в эту работу.

• ↵3 Запросы на переписку и перепечатку направляйте доктору Ын-Хе Джо, отдел фармакологии, медицинский факультет, университет Аджу, Сувон, 442-721, Корея. Электронный адрес: ehjoe {at} ajou.ac.kr

• ↵4 Сокращения, использованные в этой статье: ГАЗ, γ-IFN-активированная последовательность; GPCR, рецептор, связанный с G-белком; PAK, p21-активированная киназа; PBD, p21-связывающий домен; SOCS, супрессор передачи сигналов цитокинов; Сос, бессемирный сын.

• Получено 23 февраля 2004 г.
• Принято 10 августа 2004 г.

• Авторское право © 2004 Американская ассоциация иммунологов

Ссылки

1. ↵

   Ридет, Дж. Л., С. К. Малхотра, А. Приват, Ф. Х. Гейдж. 1997. Реактивные астроциты: клеточные и молекулярные признаки биологической функции. Trends Neurosci. 20: 570.

2. ↵

   Матышак, М.К .. 1998. Воспаление в ЦНС: баланс между иммунологической привилегией и иммунными реакциями. Прог. Neurobiol. 56:19.

3. ↵

   Streit, W. J., S.A. Walter, N.A. Pennell. 1999. Реактивный микроглиоз. Прог. Neurobiol. 57: 563.

4. ↵

   Старк, Г. Р., И. М. Керр, Б. Р. Уильямс, Р. Х. Сильверман, Р. Д. Шрайбер. 1998. Как клетки реагируют на интерфероны. Анну. Rev. Biochem. 67: 227.

5. ↵

   Дарнелл, Дж. Э. младший, И. М. Керр, Г. Р. Старк. 1994. Пути Jak-STAT и активация транскрипции в ответ на IFN и другие внеклеточные сигнальные белки. Наука 264: 1415.

6. ↵

   Попко Б., Дж. Г. Корбин, К. Д. Бервальд, Дж. Дюпри, А. М. Гарсия. 1997. Влияние гамма-интерферона на центральную нервную систему. Мол. Neurobiol. 14:19.

7. ↵

   Йонг, В.W., R. Moumdjian, F. P. Yong, T. C. Ruijs, M. S. Freedman, N. Cashman, J. P. Antel. 1991. γ-Интерферон способствует пролиферации астроцитов взрослого человека in vitro и реактивному глиозу в мозге взрослой мыши in vivo. Proc. Natl. Акад. Sci. США 88: 7016.

8. ↵

   Chung, I. Y., E. N. Benveniste. 1990. Продукция фактора некроза опухоли-α астроцитами: индукция липополисахаридом, IFN-γ и IL-1β. J. Immunol. 144: 2999.

9. ↵

   Коварик, П., М. Мангольд, К. Рамзауэр, Х. Хейдари, Р. Стейнборн, А. Зоттер, Д. Э. Леви, М. Мюллер, Т. Декер. 2001. Специфичность передачи сигналов с помощью STAT1 зависит от Sh3 и С-концевых доменов, которые регулируют фосфорилирование Ser ⁷²⁷ , по-разному влияя на экспрессию специфического гена-мишени. EMBO J. 20:91.

10. ↵

    Рамана, К. В., М. Чаттерджи-Кишор, Х. Нгуен, Г. Р. Старк. 2000. Сложные роли Stat1 в регуляции экспрессии генов.Онкоген 19: 2619.

11. ↵

    Марреро, М. Б., Б. Шиффер, В. Г. Пакстон, Л. Хердт, Б. К. Берк, П. Делафонтейн, К. Э. Бернстайн. 1995. Прямая стимуляция пути Jak / STAT рецептором ангиотензина II AT1. Природа 375: 247.

12. ↵

    Чжун, З., З. Вен, Дж. Э. Дарнелл, мл. 1994. Stat3: член семейства STAT, активируемый фосфорилированием тирозина в ответ на эпидермальный фактор роста и интерлейкин-6.Наука 264: 95.

13. ↵

    Park, ES, H. Kim, JM Suh, SJ Park, SH You, HK Chung, KW Lee, OY Kwon, BY Cho, YK Kim, et al 2000. Вовлечение JAK / STAT (киназа Януса / датчик сигнала и активатор транскрипции) в сигнальном пути тиреотропина. Мол. Эндокринол. 14: 662.

14. ↵

    Пеллетье, С., Ф. Дюамель, П. Куломб, М. Р. Попофф, С.Мелочь. 2003. GTPases семейства Rho необходимы для активации передачи сигналов Jak / STAT рецепторами, сопряженными с G-белком. Мол. Клетка. Биол. 23: 1316.

15. ↵

    Саймон А. Р., Х. Г. Викис, С. Стюарт, Б. Л. Фанбург, Б. Х. Кокран, К. Л. Гуан. 2000. Регулирование STAT3 путем прямого связывания с ГТФазой Rac1. Наука 290: 144.

16. ↵

    Хориучи, М., Т. Х. Цуй, З. Ли, Дж. М. Ли, Х. Накагами, М.Иваи. 2003. Флувастатин усиливает ингибирующие эффекты селективного блокатора рецепторов ангиотензина II типа 1, валсартана, на формирование сосудистой неоинтимы. Тираж 107: 106.

17. ↵

    Arrieumerlou, C., C. Randriamampita, G. Bismuth, A. Trautmann. 2000. Rac участвует в ранней передаче сигналов TCR. J. Immunol. 165: 3182.

18. ↵

    Ву, К. Х., Х. Дж. Ю, С. Х. Чо, Ю. В. Эом, Дж.С. Чун, Ю. Дж. Ю, Дж. Х. Ким. 2002. Лейкотриен B ₄ стимулирует каскад Rac-ERK для генерации активных форм кислорода, которые опосредуют хемотаксис. J. Biol. Chem. 277: 8572.

19. ↵

    Ли, Б., Х. Ю, В. Чжэн, Р. Фолл, С. На, А. В. Робертс, Д. А. Уильямс, Р. Дж. Дэвис, С. Гош, Р. А. Флавелл. 2000. Роль гуанозинтрифосфатазы Rac2 в дифференцировке Т-хелперных клеток 1. Наука 288: 2219.

20. ↵

    Амбрузо, Д.R., C. Knall, AN Abell, J. Panepinto, A. Kurkchubasche, G. Thurman, C. Gonzalez-Aller, A. Hiester, M. deBoer, RJ Harbeck, et al. 2000. Синдром иммунодефицита нейтрофилов человека ассоциирован с ингибирующей мутацией Rac2. Proc. Natl. Акад. Sci. США 97: 4654.

21. ↵

    Робертс, А. В., К. Ким, Л. Жен, Дж. Б. Лоу, Р. Капур, Б. Петриняк, А. Спаетти, Дж. Д. Поллок, Дж. Б. Борнео, Г. Б. Брэдфорд и др. 1999.Дефицит специфической для гематопоэтических клеток GTPase Rac2 семейства Rho характеризуется нарушениями функции нейтрофилов и защиты хозяина. Иммунитет 10: 183.

22. ↵

    Джулиан Д., Т. Дж. Бейкер. 1986. Характеристика амебоидной микроглии, выделенной из развивающегося мозга млекопитающих. J. Neurosci. 6: 2163.

23. ↵

    Багродиа, С., С. Дж. Тейлор, К. Л. Кризи, Дж. Чернофф, Р. А. Церионе.1995. Идентификация мышиной p21 ^{Cdc42 / Rac} -активированной киназы. J. Biol. Chem. 270: 22731.

24. ↵

    Ли, М., Х. Дж. Ю, С. Х. Чо, С. Х. Ву, М. Х. Ю, Э. Х. Джо, Дж. Х. Ким. 2002. Влияние малой GTPase Rac1 на образование активных форм кислорода в ответ на β-амилоид в клетках астроглиомы C6. Biochem. J. 366: 937.

25. ↵

    Тесситоре, А., Л. Пасторе, А.Рисполи, Л. Чиленти, Э. Тониато, В. Флати, А. Р. Фарина, Л. Фрати, А. Гулино, С. Мартинотти. 1998. Два сайта активации γ-интерферона (GAS) на промоторе гена молекулы межклеточной адгезии человека (ICAM-1) необходимы для индукции транскрипции IFN-γ. Евро. J. Biochem. 258: 968.

26. ↵

    Чжоу, З. Х., П. Чатурведи, Ю. Л. Хан, С. Арас, Ю. С. Ли, П. Е. Колаттукуди, Д. Пинг, Дж. М. Босс, Р. М. Рансохофф. 1998. Индукция IFN-γ гена хемоаттрактантного белка моноцитов человека (hMCP) -1 в клетках астроцитомы: функциональное взаимодействие между IFN-γ-активированным сайтом и GC-богатым элементом.J. Immunol. 160: 3908.

27. ↵

    Lundquist, E. A. 2003. Rac белки и контроль развития аксонов. Curr. Opin. Neurobiol. 13: 384.

28. ↵

    Динауэр, М. С. 2003. Регулирование функции нейтрофилов с помощью Rac GTPases. Curr. Opin. Гематол. 10: 8.

29. ↵

    Ридли, А. Дж .. 2001. Белки семейства Rho: координирующие клеточные ответы.Trends Cell Biol. 11: 471.

30. ↵

    Сцита, Г., Дж. Нордстром, Р. Карбоне, П. Тенка, Г. Джардина, С. Гуткинд, М. Бьярнегард, К. Бетсхольц, П. П. Ди Фиоре. 1999. EPS8 и E3B1 преобразуют сигналы от Ras к Rac. Природа 401: 290.

31. ↵

    Терамото, Х., П. Салем, К. С. Роббинс, X. Р. Бустело, Дж. С. Гуткинд. 1997. Фосфорилирование тирозина протоонкогенного продукта vav связывает FcεRI с путем Rac1-JNK.J. Biol. Chem. 272: 10751.

32. ↵

    Английский язык, Б. К., С. Л. Орличек, З. Мей, Э. А. Питание. 1997. Бактериальный ЛПС и IFN-γ запускают фосфорилирование тирозина vav в макрофагах: доказательства участия тирозинкиназы hck . J. Leukocyte Biol. 62: 859.

33. ↵

    Micouin, A., J. Wietzerbin, V. Steunou, M.C. Martyre. 2000. p95 ^vav связывается с рецептором интерферона I типа (IFN) и способствует антипролиферативному эффекту IFN-α в мегакариоцитарных клеточных линиях.Онкоген 19: 387.

34. ↵

    Иган, С. Э., Б. В. Гиддингс, М. В. Брукс, Л. Будай, А. М. Сизеланд, Р. А. Вайнберг. 1993. Ассоциация обменного белка Sos Ras с Grb2 участвует в трансдукции и трансформации тирозинкиназного сигнала. Природа 363: 45.

35. ↵

    Кребс, Д. Л., Д. Дж. Хилтон. 2000. SOCS: физиологические супрессоры передачи сигналов цитокинов. J. Cell Sci. 113: 2813.

36. ↵

    Park, E. J., S. Y. Park, E. H. Joe, I. Jou. 2003. 15d-PGJ2 и розиглитазон подавляют воспалительную передачу сигналов Janus kinase-STAT посредством индукции супрессора передачи сигналов цитокинов 1 (SOCS1) и SOCS3 в глии. J. Biol. Chem. 278: 14747.

37. ↵

    Кнаус, У. Г., Й. Ван, А. М. Рели, Д. Варнок, Дж. Х. Джексон. 1998. Структурные требования для активации PAK с помощью Rac GTPases.J. Biol. Chem. 273: 21512.

Как найти свою гостиницу. Как узнать свой ИНН по имени? Если у вас есть справка о присвоении ИНН